枸杞多糖对己烯雌酚致仓鼠及雄性后代生精细胞凋亡的缓解作用

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1、^^^f^fAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文枸杞多糖对己婦雌醋致仓鼠及雄性后代生精细胞凋亡的缓解作用学位申请人：刘玉姣指导教师：马爱团教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月二十四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究

2、所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：义ij五政签字日期：10$年义月沙日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：LH导师签名：签字曰2s年月曰签字曰期：⑶比年〈月计口学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:

3、通讯地址:邮编:分类号：S853.74单位代码：10086密级：公开学号：2012368枸杞多糖对己烯雌酚致仓鼠及雄性后代生精细胞凋亡的缓解作用ProtectiveEffectsofLyciumBarbarumPolysaccharidesonSpermatogenicCellApoptosisInducedbyDiethylstilbestrolinHamsterandMaleOffspring学位申请人：刘玉姣指导教师：马爱团教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月二十四日摘要本试验主要研

4、究己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES）染毒雄性成年仓鼠对其睾丸和附睾生精细胞凋亡及其后代生精细胞凋亡的影响及枸杞多糖（Lyciumbarbarumpolysaccharide，LBP）的缓解作用。将90只成年雄性仓鼠正常饲养7d后，随机分为6组（n=15）。于末次给药24h后，每组均随机选取5只仓鼠，乙醚麻醉致死，取出睾丸快速分离睾丸周围的脂肪，放入波恩氏液中固定，制作石蜡切片，应用免疫组化方法测定Caspase-8、Caspase-9、P53、ER及AR的表达与定位；另外摘取两侧附睾，左侧附睾尾放于波恩氏液中固定，制做

5、石蜡切片，HE染色观察其组织学变化，免疫组织化学法检测凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、P53的表达与定位；右侧附睾尾于37℃生理盐水中剪碎，取精子悬液观察精子形态，计算精子密度和畸形率。末次给药24h后，各试验组均随机选取5只雄性仓鼠，与发情母鼠按1:2比例合笼，连续2个发情周期（9d），每天早晨，对雌鼠进行阴道涂片，镜检发现精子者视为合笼成功，记为孕1d。将怀孕母鼠单独饲养，期间喂给正常的饲料和水，待其分娩。分别记录每只母鼠妊娠率、妊娠日期、产仔数、雌雄比例、仔鼠PND0d、7d、14d、21d、28d和56d体重。饲养雄

6、性仔鼠至性成熟，乙醚麻醉致死仓鼠，取睾丸组织，称量并计算器官指数，将睾丸固定在波恩氏液中，制作石蜡切片，观察组织学变化，并检测睾丸中Fas、FasL及Caspase-3的表达与定位；分别摘取两侧附睾，称重并计算器官指数，左侧附睾尾放于波恩氏液中固定，制做石蜡切片，HE染色观察其组织学变化；右侧附睾尾于37℃生理盐水中剪碎，取精子悬液观察精子形态，计算精子密度和畸形率。6个试验组中剩余的30只雄性仓鼠，继续饲喂3个月，观察3个月后仓鼠睾丸的组织学变化；取附睾，计算精子密度和畸形率。结果显示：（1）F0代成年雄性仓鼠用DES处理后，附睾组织形态

7、发生明显变化；补充LBP后，附睾管上皮细胞排列整齐，结构完整，损伤明显减少，尤其是在LBP高剂量组（50mg/kg）是最明显的，维生素组附睾组织形态也得到很好的恢复，且LBP高剂量组与维生素组无显著差异。DES显著降低F0代仓鼠精子数量，提高精子畸形率（P<0.01），而LBP可以提高F0代雄鼠精子数量，降低畸形率，维生素对精子数量和畸形率也有显著作用。通过免疫组化法检测证实，DES引起F0代成年仓鼠睾丸内生精细胞大量凋亡，显著提高Caspase-9的表达（P<0.01）；给予不同剂量的LBP后，Caspase-9及P53的达呈剂量依赖性降

8、低，以LBP高剂量组表达最低（P<0.01），同时LBP高剂量组的Caspase-8阳性表达与对照组相比差异不显著。DES显著降低AR基因的表达（P<0.01），添加LBP后，各