朊病毒病相关lncrna表达谱分析研究

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：Graduatenumber：XS1291012Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationResearchandanalysisoflongnon-codingRNAexpressionspectrum,aco-factorforPriondiseasePostgraduate：ZhangTenglongSupervisor：

2、ProfessorChenZhi-baoMajor：BiochemistryandMolecularBiologyResearchdirection：MolecularvirologyCollege：CollegeofLifeScienceandTechnologyDaqingChina06,2015摘要［背景］朊病毒病是一种高致病性，高致死性的神经退行性疾病，是由于细胞内正常的朊蛋白发生构象改变，形成的一种抗逆性极强，能够大量聚集在神经细胞内的有毒蛋白ScPrP，导致细胞代谢紊乱，神经细胞大量死亡。现已证明，人

3、们误食感染疯牛病的牛肉后，会引起人类朊病毒病（克雅氏病），由此可见，朊病毒病已经打破了种间屏障，成为严重威胁人类健康的一种人兽共患病。经过朊病毒学者们的不懈努力和深入研究，发现细胞内可能存在与朊病毒感染、致病相关的宿主因子。LncRNA是近些年发现的一种重要的长链非编码RNA分析，长度大于200nt，参与了生命过程中一系列重要进程，可能是朊病毒致病的重要协助因子，它的研究给朊病毒病的发病机理带来了希望，因此，我们对与朊病毒病相关的LncRNA分子进行了初步的筛选与鉴定。［方法］本实验通过建立朊病毒小鼠鼠脑LncR

4、NA和mRNA表达谱，根据分析结果，初步筛选出与朊病毒致病相关的LncRNA分子；然后使用生物信息学可高精度分辨出功能性LncRNA分子的靶向关系，参与生物学进程等；利用荧光定量PCR和Westernblotting定量分析功能性LncRNA分子对朊蛋白基因以及朊病毒复制的作用。［结果］建立朊病毒病模型小鼠脑部LncRNA和mRNA表达谱，并通过荧光定量PCR进行了验证，最终检测出6条LncRNA表达量相比对照组下调，13条LncRNA表达量相比对照组上调；建立了小鼠海马组织中mRNA芯片，共检测出170条差异表

5、达的mRNA分子，其中25条mRNA表达下调，145条miRNA表达上调。通过生物信息学分析预测，得到差异性表达LncRNA作用的靶基因以及靶基因的功能和参与细胞信号转导通路。荧光定量PCR分析得知过表达LncRNA-2对Prnp基因并没有显著影响，WesternScScBlotting检测ScN2a细胞内PrP含量说明，过表达LnRNA-2后能够抑制PrP蛋白的复制。［结论］本实验建立了完整的朊病毒病小鼠海马组织LncRNA以及mRNA表达谱，通过生物信息学分析初步筛选出了LnRNA-2进行深入研究，利用荧光定

6、量PCR和Westernblotting初步验证了该分子高表达之后能够抑制朊病毒复制。为后续研究长链非编码RNA以及朊病毒相关分子伴侣提供了一个理论的支持，奠定了基础。关键词：长链非编码RNA，基因芯片，朊病毒，分子伴侣IIAbstract[Background]PriondiseaseisakindofneuropathicdiseasewithhighpathogenicityandSclethality.ItiscausedbyPrP,anaggregatedmoietyofthehost-derivedm

7、embranecglycolipoprotein-PrP,accomplishedbydisorderedcellularmetabolismandmassmortalityofnervecell.Now,ithasbeenprovedthathumanwouldinfectCreutzfeldt-Jacobdisease(CJD)ifintakesomebeefcontaminatedwithMCD(madcowdisease).Thus,wecanconcludethatpriondiseasehasbrok

8、enthebarriersofthegenusandhasalsobecomeakindoflife-threateningamphixenosis.Afterresearchers’intensivestudy,thereisprovedtobesomehostfactorsinsidecelsl,whichmighthaverelationshipswithinfec