曲古菌素a调控stat5a干预胃癌细胞增殖的研究

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1、曲古菌素A调控STAT5A干预胃癌细胞增殖的研究TheinterventionofTrichostatinAonproliferationofthegastriccancercellsbyregulatingexpressionofSTAT5A作者姓名：南姝利专业名称：药理学指导教师：陈霞教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月25日中文摘要胃癌(gastriccancer)是一种常见肿瘤，全球每年约有70万人死于胃癌。目前对胃癌的治疗以手术切除为主，同时配合放疗和化疗药物治疗，但由于放疗和化

2、疗对机体正常细胞有副作用，导致临床疗效降低，病人预后不良。因此，寻求胃癌新的治疗靶标及药物成为目前亟待解决的问题。信号转导与转录激活子5A(signaltransducerandactivatorofTranscription5A,STAT5A)是STAT家族中的一员。有研究表明，正常组织STAT5A的表达量较少，但肿瘤组织中STAT5A的表达量则会明显增多。此外，STAT5A与肿瘤细胞的增殖、分化、存活与凋亡存在着密切的关系。据文献报道，其下游有许多对应靶点，其中端粒酶是其重要靶点之一，当敲除ST

3、AT5A后，端粒酶的表达量减少，活性降低。端粒酶具有使细胞增殖分裂的作用，其活性的高低关系着肿瘤细胞增殖能力的强弱。因此，推测胃癌细胞的高度增殖可能与STAT5A表达增加，进而调节端粒酶活性影响细胞增殖能力相关。曲古菌素A（TrichostatinA,TSA）是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylases,HDACs）抑制剂。近年来发现，TSA对多种肿瘤具有促进凋亡及抑制增殖等作用。究其原因是由于TSA可以通过调节组蛋白乙酰化程度，从而调控肿瘤中相关基因转录及其蛋白的表达，进而

4、干预肿瘤的生物学功能。目前，已有文献报道，TSA对胃癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期等具有一定的调节作用，但具体机制尚未明确。实验目的：本实验旨在研究TSA是否通过调控STAT5A表达，对胃癌细胞增殖能力及其细胞周期产生影响；并且观察这种作用是否由调节端粒酶活性产生；探讨TSA的干预作用是否通过调控Ⅰ类HDACs活性而实现。实验方法：实验以胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823及胃上皮细胞系GES-1为观察对象，通过westernblot技术检测其STAT5A表达；通过CCK-8法确定TSA给予的时

5、间和浓度；通过westernblot检测给药前后SGC-7901和BGC-823细胞系STAT5A表达的变化情况；随后通过CCK-8法和流式细胞术观察给药前后细胞增殖与细胞周期的变化情况；应用端粒酶活性检测试剂盒测定给药前后端粒酶活性变化情I况；最后应用HDACs活性试剂盒检测给予TSA前后HDACs活性的变化情况。实验结果：实验发现，胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823中STAT5A的表达量高于胃上皮细胞系GES-1中STAT5A的表达量，具有显著的统计学差异（P＜0.05）；给予300nM

6、TSA后SGC-7901和BGC-823中STAT5A表达量均降低，且呈时间依赖性；其中胃癌细胞系BGC-823细胞在给予300nMTSA后STAT5A表达量降低尤为显著；给予300nMTSA后，检测SGC-7901和BGC-823细胞的增殖情况，结果显示，SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制；给予300nMTSA孵育24h后，检测结果显示，SGC-7901和BGC-823细胞周期阻滞在G1期；此外，两种细胞给药后端粒酶活性均减弱，其中BGC-823细胞系给予300nMTSA后与未

7、给予TSA的对照组相比，端粒酶活性降低具有显著性差异（P＜0.01）；SGC-7901和BGC-823细胞给药后HDAC1、2、3、8的活性均有不同程度的下降，并且在BGC-823细胞中上述四种HDAC活性下降更为明显。实验结论：1.胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中STAT5A呈现高表达；TSA可以抑制胃癌细胞增殖，使细胞周期阻滞在G1期；2．TSA可时间依赖性地下调胃癌细胞中STAT5A的表达，并且降低端粒酶的活性；3．TSA降低胃癌细胞系中STAT5A的表达可能通过影响Ⅰ类HDACs

8、活性实现的。关键词：胃癌；乙酰化；STAT5A；曲古菌素AIIAbstractGastriccancerisoneofthemostcommonmalignanttumors.Approximately70thousandpeopleannuallydiedofgastriccancerallworldwide.Thetreatmentofgastriccancermayoraimattumorresection.However,surgicaltreatmenton