新城疫病毒d90毒株抑制人胃癌bgc-823细胞的体内外研究

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：R735.2Graduatenumber：XS1291015Confidentialdegree：publicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationTheinhibitioneffectofNewcastlediseasevirusD90strainonhumangastriccancercellBGC-823invivoandinvitroPostgraduate：LiKun-pengS

2、upervisor：ProfessorYuLi-yun,LiXiMajor：BiochemistryandMolecularBiologyResearchdirection：OncologyCollege：CollegeoflifescienceandbiotechnologyDaqingChina04,2015摘要胃癌是发展中国家主要的消化系统恶性肿瘤之一，也是世界范围内最常见的因癌症导致死亡的肿瘤之一。通常，对于合并有散播或者转移病变的患者，外科手术或系统化疗带来的生存优势是有限的。目前研究认为，利用病毒进行溶瘤治疗是一种很有

3、前途的肿瘤治疗方式。许多病毒被发现具有溶瘤作用。例如腺病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、单纯疱疹病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒和新城疫病毒。新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）是一种重要的溶瘤病毒。NDV是一种家禽病毒，属副粘液病毒，对禽类具有高度的致病性，可以引起禽类的新城疫，被认为是重要的溶瘤病毒之一。NDV可有选择性地在肿瘤细胞中增殖并起到特异杀伤作用，不能在人正常细胞中复制，只能在特定肿瘤细胞中增殖。除了轻微的流感样症状和结膜炎，对人基本无致病性，具有较好的安全性。某些临床试验证明鸡新城疫病毒是一

4、种高效、安全的治疗肿瘤的试剂。目前研究可用于治疗人类肿瘤的NDV包括MTH68/H、PV-701、73-T和HUJ。NDV-D90毒株是新分离得到的新城疫病毒，对癌细胞具有快速、高效杀伤的能力。本研究通过检测NDV-D90病毒在BGC-823细胞上清中的效价，分析NDV-D90在胃癌BGC-823细胞内的扩增能力。检测不同MOI值的NDV-D90对人胃癌BGC-823细胞株的细胞毒性分析NDV-D90毒株对胃癌BGC-823细胞生长的影响和MOI的变化对BGC-823细胞杀伤能力的变化。利用流式细胞术，分析NDV-D90对胃癌BG

5、C-823细胞凋亡的作用影响。肿瘤细胞侵袭实验分析NDV-D90抑制胃癌BGC-823细胞侵袭转移的能力。用慢病毒载体GV260构建一株带有荧光素酶标记的BGC-823细胞，命名为BGC-823-luci。用细胞毒性实验比较分析NDV-D90对BGC-823和BGC-823-luci的杀伤能力的差异。用BGC-823-luci细胞构建裸鼠胃癌移植瘤模型。实验组移植瘤注射NDV-D90，对照组移植瘤注射PBS，利用发光分子成像技术评价分析实验组和对照组荧光信号。取实验组和对照肿瘤组织，用HE染色分析裸鼠体内的肿瘤坏死情况。结果显示N

6、DV-D90在人胃癌BGC-82310细胞的增殖能力很强，在感染后为60h时最大值达到10TCID50/0.1ml。NDV-D90对人胃癌BGC-823细胞具有很强的细胞毒作用，最大杀伤率达到80%以上且MOI越高，细胞的死亡率越高，细胞死亡出现的也越快。流式细胞术结果显示NDV-D90在MOI为1感染时间为72h时，细胞的死亡率最大，达到79%，细胞凋亡随着感染时间的增长和MOI值的增大而加快。胃癌移植瘤体内实验结果发现注射NDV移植瘤的体积明显小于对照组。小动物活体成像也显示注射病毒肿瘤组织的体积和荧光信号明显小于注射PBS肿

7、瘤体积。IHE染色结果显示实验组肿瘤组织出现大面积坏死，对照组生长状态良好。NDV-DN90对胃癌BGC-823细胞在体内外都有很好的抑制作用，可能成为一种溶瘤制剂。关键词：新城疫病毒D90毒株，胃癌BGC-823细胞系，凋亡，坏死IIAbstractGastriccarcinomaisoneofthemalignanttumorsofhumanalimentarytractindevelopingcountry.Itisalsooneofthecommontumorswithhighmortalityallovertheworl

8、d.Forthepatientswithtumormetastasis,thereisalowerchanceofsurvivalaftertreatedbysurgeryorchemotherapy.Recentreportsindicateth