两株新城疫病毒强毒致病性的比较研究

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2、２００２４１＇．每＾’＇＼陈素媽副教授扬州大学江苏扬州２２５００９．．，，，Ｊ：；；＂．申请学位级别：硕去学科专业名称：预防兽医学．，占论文提交日期：２０１５年５月论文答辩日期：２０１５年６月．学位授予单位；扬州大学学位授予２０１５年６月＾日期：牽《苗答辩委员会主席：＾文评阅人：於兰裳／令－Ｑ２０１５年６月？若糸為作＾＇＇＇ｙ－ｒ＇＾ｒＹｙｒｒｊｙｉ两株新城疫病毒强毒致病性的比较研究ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ

3、ＢｅｔｗｅｅｎＴｗｏＶｉｒｕｌｅｎｔＮｅｗｃａｓ讨ｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓＳｔｒａｉｎｓ本论文受［鸡新城疫防控技术研究与示范（２０１３０３０巧）；公益性行业（农业）科硏专项经费］支持研巧生；刘开春专业：预防兽医学导师；彭大新教授Ｔ伊研究员陈素娟副教授扬州大学兽医学院２０１５年６刘开春＝两株新城疫病毒强毒致病性的比较研巧＾两株新城疫病毒强毒致病性的比较研究摘要ＮＤ一新城疫（Ｎｅｗｃａｓ也ｄｉｓｅａｓｅ）是危害世界养禽业的种重要传染性疾病

4、，，其病原为新城疫病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓＮＤＶ）。根据遗传进化距罔，ＮＤＶ，可分为ＣｌａｓｓＩ和ＣｌａｓｓＩＩ两大分支，目前己知的ＣｌａｓｓＩＮＤＶ自然分罔株均为一Ｉ／Ｊ（弱毒株。本实验室保存的株无毒力鸭源ＣｌａｓｓＮＤＶＤｕｃｋＳ／１０ＨＱ００８３３７），０ＪＳ－ＡＩ将该株病毒经气囊连续传代１次后得到了变异株ＩＯＯ。经测定该变异株的ＭＤＴ、ＩＣＰＩ、ＩＶＰＩ等毒力指标均符合强毒标准，其Ｆ蛋白裂解位点亦变为ｉｉ２ｉｉ７－ＫＲＱＫＲＰ。动物试验发

5、现，ＪＳ１０Ａ１０通过肌肉注射或静脉注射途径对鸡的致死率均为１００％，而通过滴鼻、点眼自然感染的途径却不能致死鸡，这与已知的新城疫传统强毒株的特性严重不狩。为了解析该变异强毒株与传统强毒株的致ＮＤＶ国Ｈｅｒｔｓ／１－病性差异，我们选择了际标准强毒株３３与变异株ＪＳ０Ａ１０分别从体内、体外试验Ｗ及生物信息学分析对两者的致病力进行了系统的分析和比较。１．两株新城疫病毒强毒细胞感染的比较试验－－Ａ，比分别使用ＪＳ１０１０和Ｈｅｒｔｓ／３３在体外感染ＤＦ１和脾淋己细胞较了这两株强毒在细胞水

6、平上的致病性。在不同时间点分别检测两株病毒感染细胞后上－清的病毒滴度，结果表明，Ｈｅｒｔｓ／３３的滴度要比ＪＳ１０Ａ１０稍高，但经统计后无明显差异，２ｈ、１抓。两株病毒感染脾淋己细胞后分别在６ｈ、１和２４ｈ收集细胞样ＵＦＮａ－－正－ＩＦ１、正）。品，检测细胞因子、ＮＰ、ＩＦＮｒ、化目６和１８的表达情况－Ａ结果表明，ＪＳ１０１０和Ｈｅｒｔｓ／３３在不同时间点诱导脾淋己细胞表达细胞因子的一－变化趋势基本致，ＪＳ１０Ａ１０和，在ｍＲＮＡ的转录水平上无显著差异。同时化ｒｔＤＦ－ｓ／３３诱导

7、１细胞Ｗ及脾淋己细胞产生的调ｔ水平均无显著差异。此外，两株病毒引起的细胞病变程度也进一步表明两者在细胞水平的致病力相似。２．两株新城疫病毒强毒感染ＳＰＦ鸡的致病力差异分析１０－Ａ１０ｒｔＦ鸡ＪＳ和Ｈｅｓ／３３分别通过滴鼻点眼和肌肉注射感染４周龄ＳＰ，根Ｍ扬州大学硕±学位论文据不同组织的病毒载量、病变程度、细胞因子表达量Ｗ及机体的排毒和抗体水平，－Ａ比较两株强毒株对鸡致病力差异。ＪＳ１０１０滴鼻点眼感染组在第５天病毒滴度３４－最高（１０１０ＥＬＤ５０），但第７天开始病毒在组织的分布

8、逐渐降低直至消失；而－ｅｓ化１０Ａ１０肌肉注射组和Ｈｒｔ／３３感染组感染后病毒滴度不断増加，直至鸡死亡，６－Ａ且病毒量可达到１〇ＥＬＤ５〇。ＪＳ１０１０和Ｈｅｒｔｓ／３３通过滴鼻点眼途径感染鸡，取－其贿、肺、肠、和气管制作病理切片。结果表明，ＪＳ１０Ａ１０感染鸡只有肺脏组织切片稍微出血，而Ｈｅｒｔｅ／３３感染鸡脾、肺、肠和气管都有显著病变，尤其肺脏大片出血－。排毒结