斯氏艾美尔球虫体外培养的研究

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1、．巻＇‘—．７２：；／，，今分类号Ｓ８５２学号２。？＂＂Ｐ裘老未聲Ｉ麵全日制硕±专业学位论文ｊＭ■＂ｗｍ斯氏支美尔球虫体外培养的研究＂拳国姓名：安伟胃指导教师：宁官保副教授胃学位类别：兽医硕±胃培养单位；动物科技学院中国？山西？太谷二〇—五年六月ＳｈａｎｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｕ－ｌｌｔｉｍｅＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｇＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｃｕｌｔｉ

2、ｖａｔｉｏｎｏｆＳｔｅｉｎｍａｎｎＥｉｍｅｒｉａｉｎｖｉｔｒｏＮａｍｅ：ＷｅｉＡｎＳｕ－ｅｒｖｉｓｏｒ：ＶｉｃｅＰｒｏｆ．ＧｕａｎｂａｏＮｉｎｐｇＤｅｒｅｅＣａｔｅｏｒ：ＭａｓｔｅｒｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｇｇｙｙＴｒａｉｎｉｎｇＵｎｉｔ：ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅ化ｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｙＴａｉｇｕＳｈａｎｘｉＣｈｉｎａＪｕｎｅ，２０１５学位论文原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文，是在导师

3、指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中色注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经策表或撰写过的作品成果。对本文研究做出过重要贡献的个人和集体，均已在文中从明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签為（亲笔如／（年／月／Ｃ日学位论文版权使用授权书、使用学位论文的规定本学位论文作者完全了解学校有关保留。即学位论文的知识产权属山西农业大学；同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的原件、農印件和电子版；允许论文被查阅和借阅；本人授权山西农业大学可ｋ乂将学位

4、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可从采用影印、缩印或柱描等复制手段保存、汇编学位论文。作者签名（亲笔乃／Ｃ年（月日导师签若＾＇／月曰（亲笔）：身７０年目录摘要１文献综述３１斯氏艾美尔球虫生活史４２斯氏艾美尔球虫对家兔致病性研究５３斯氏艾美尔球虫免疫学研究６３１６．可溶性抗原３７．２裂殖子抗原３．３粪抗原７４疫苗的研究７４．１强毒活疫苗７４．２弱毒活疫苗８４．３基因工程苗８５体外培养研究８前胃１０材料与方法１１

5、１试验材料１１１．１试验试剂１１１．２仪器及器材１１１１．３主要试剂配制２１１．４实验动物及病变肝脏４２实验过程１４２．１试验前准备工作１４２．２斯氏艾美尔球虫的分离纯化及拖子化１５２．３兔肝细胞的原代培养和传代培养１６３主要试验指标的确定２０３．１庶搪浓２０３．２兔肝细胞原代培养主要实验指标２０３．３病变计分２２试验结果与讨论２３１试验结果２３１１．斯氏艾美尔球虫卵囊的分离纯化２３１．２斯氏艾美尔球虫卵囊抱子化２３１．３兔

6、肝细胞的原代培养２３１．４将兔肝细胞转接至细胞培养板２４１．５斯氏艾美尔球虫在细胞培养板中生长观察结果２４、１．６叶酸、ＶＢ６ＶＢ１的对斯氏艾美尔球虫卵囊产量的影响２４１．７验证试验结果２５２冊２７全：＾誠２９参考献３０Ａｂｓｔｒａｃｔ３５致谢３９斯氏艾美尔球虫体外培养的妍究摘要目的：通过将兔肝球虫接种至兔肝细胞在体外进行培养从而获得兔肝球虫病的中并，发病病原即斯氏艾美尔球虫一。为进步研究斯氏艾美尔球虫的生活史、致病性Ｗ及针对此病的防治药物和疲苗

7、提供必要的前提条件。方法：将经过驱虫处理的幼兔致死后取出肝脏，进行原代细胞培养获得稳定的原代，细胞后，再转接到２４化培养板中；同时对从长治肉兔养殖场采集的病变肝脏，经分离纯化获得杂质较少的球虫卵裳后抱子化培养，待抱子化率达到８５％Ｗ上时，对其进行，用机械研磨的方法对其进行破壁，分离子抱子；随后将分离的球虫子抱子接种到色长满培养孔底部的兔肝原代細胞中，观察其增殖情况，Ｗ获得斯氏艾美尔球虫卵爱；化后将卵爱接种到健康幼兔体内中，对其致病力进行验证并对结果进行分析。结表（１）兔肝原代细胞培养的实验结果显示

8、：致死兔子后不放血的操作较易获得兔，肝原代细胞。在培养约化ｈ后出现零星的贴壁约４－５ｄ后出现稳定的生长情况经２０ｄ，，左右的培养Ｗ及机械刮涂干扰细胞后，可获得活力较高的兔肝原代细胞。（２）斯氏艾美尔球虫卵爱抱子化的实验结果显示：在浓度为２．５％的重絡