微流控芯片高效捕获乳腺癌细胞mda-mb-231及再培养研究

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1、■？．．掌堯乂遂硕±学位论文－－２３微流控芯片高效捕获乳胺癌细胞ＭＤＡ服１及再培养研究－－ＩＭＢ２３１ＨｃａａｔｕｒｅｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅＩＭＤＡｉｈｅｆｆｉＣｉｅｎｔｇｉａｎｄＲｅ－ｃｕｌｔｕｒｅｂｙｕｓｉｄｉｃＣｈｉｉｎｇＭｉｃｒｏｆｌｕｐ学号Ｄ１２２０１０４１姓名桑维维学位类别理学硕±造說生物化学自分子生物指导教师邢更妹研究员完成时间２０１５年５月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下迸斤的硏巧工作及取得的研究成果。据我

2、所知，论文中不包含其，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安歡大学或其他教育机构的一学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本骄究所数的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期；年歹月诚日学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解安藏大学有关保留使用学化论文的规定，有权。保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被绘阅和借爾本人授权安敏大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数踞摔迸巧检索，可Ｕ采烟影印。、缩印或扫描等

3、赞制手段保存、汇编学位论支（保密的学位论文在解密适巧本授权书）、么於＿＿＾：；（１学值论文作者签名；导师签名＾＾｜■：签字円期＾；义０您半月／曰；化年Ｊ月）家日签字曰期学位论文作者毕业去向；工作单位：电话：：通讯地址：邮编Ｉ＾摘要近年来，乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤，发病率高，大多与抑癌基因发生基因突变密切相关，从而导致正常细胞癌变。恶性肿瘤的转移是癌症患者病情复发或者死亡的主要原因。传统的用于检测肿瘤的方法如血清肿瘤标志物和影像一学诊断对肿瘤发生早期的检出率均较低，所Ｗ有效地检测肿瘤早期的微

4、小转移直是临床医学面临的挑战。循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｄｌｓ，ＣＴＣｓ）是存在于很多肿瘤患者体内的肿瘤细胞，，它由原发灶脱落后进入人体循环或琳己系统并通过外周血转移至ｅ－远端的组织或者器官甚至遍布全身。循环肿瘤细胞具有上皮间质转换（ｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｍａ一ｅｓｅｎｃｈｙｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）和些肿瘤干细胞的生物学特性，所ｙ？在循环系统中能够进入血管、快速增殖并形成转移瘤。很多研究都表明循环肿瘤细胞的迂移、粘附等与癌症的转移和预后复发均有密切关系。所Ｗ，循环肿瘤细胞具有、很重要的临床意

5、义，对早期诊断、预后判断疗效检测和班向药物的开发等提供理论基础。在全血中的循环肿瘤细胞与血细胞数相比极少，对其进行分离、检测和纯化一仍具有定的挑战性、细胞形态、细胞密度和肿。目前主要依据肿瘤细胞的大小瘤细胞独特的生物学特性对循环肿瘤细胞进行分离，包括过滤法、密度梯度离也法、细胞表面电荷法和免疫磁珠法等。对循环肿瘤细胞的检测主要从细胞计数和一核酸表达分析两个方面进行。研究者直致力于循环肿瘤细胞的富集、检测和纯化技术的研究，希望能够找到高效捕获肿瘤细胞的方法并将其应用于临床检测。一ＣＴＣ微流控芯片是近几年飞速发展的种对ｓ进斤快速检测

6、和操控的技术。它具有可控的单元集成模式和微尺度结构一，可实现样品处理、捕获和检测体化，降低试剂和样品量的消耗，获，能实现快速、高效、高通量的分析得更多有关ＣＴＣｓ的信息。ＭＵＣ一１是类高分子糖蛋白，正常细胞中低表达，在癌细胞和癌组织中高表达并Ｗ畴形糖基化和糖基化不完全两种形态存在，从而使抗原分布在癌细胞表面，可被特异性抗体识别。ＭＵＣ１与腺癌特别是乳腺癌的癌细胞恶变、转移和浸润密切相关，其表达与乳腺癌术后复发、转移也具有相关性。Ｉ－ＭＢ－２３微流控若片高效捕获乱腺癌细胞ＭＤＡ１及再培养研究本研究利用微流控芯片作为载体

7、，通过对巧片基底表面进斤ＭＵＣ１抗体修俯利用抗原与抗体相结合的方法－ＭＢ－，实现了对人乳腺肿瘤细胞ＭＤＡ２３１的特异性捕获和研究。乳腺肿瘤细胞捕获的条件和环境严重影响了癌细胞捕获效率，因此筛选和优化捕获条件对于提高细胞捕获率很有必要。实验中从微流控基底表面的粗糖度、微流控孔道的花纹、抗体膊育时间、细胞样品注入流速、细胞注入巧片后在通道内停滞的时间等方面进行捕获条件优化，结果获得了较高的细胞捕一获率。捕获后的乳腺癌细胞经过分离和再培养，进步利用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和实时巧光定量聚合酶链式反应（Ｑ－ＰＣＲ）分别分析芯片捕

8、获是否影响乳腺癌细胞内基因表达水平