巴西橡胶树hbjaz1互作蛋白的验证及功能鉴定

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1、/0硕士学位论文题目：巴内橡胶树互作蛋白的验证及功能鉴定作者：肖华指导教师：黄惜—专业：橡胶爭时间：二〇一五年五月—ValidationandCharacterizationofHbJAZlinteractedproteinsofHeveabrasiliensisAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgricultureByXiaoHimSupervisor:Major:TheScinencesofRubberSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创

2、性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月彡日学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的

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4、有重大意义。早期我们构建了的酵母双杂诱饵载体，通过与橡胶文库杂交筛选，得到个的互作蛋白，本文在此基础上，对互作蛋白进行验证和功能鉴定，结果如下：通过技术获得、、、和五个基因的全长序列，其编码区大小分别为、、、和。将、、、和分别与进行酵母双杂鉴定，结果只有蛋白与蛋白发生互作，其他个与蛋白均无互作，表明这个基因可能是前期文库筛选中出现的假阳性，或者是这个基因与蛋白的互作需要翻译后切割修饰，全长序列不发生互作。为了进一步验证与蛋白的互作，我们利用酵母双杂检验与橡胶个蛋白之间的互作，发现与、、、、、、和个蛋白都发生互作，但与、和不互作，表明与蛋白之间的互作既具有普遍性，又表现某些特异性。

5、蛋白有类转录因子的所有结构特征，末端有一个保守的和区域，末端有一个保守的酸性转录激活结构域（和互作结构域（。为进一步鉴定蛋白是否具备转录因子的特征，我们构建与红色荧光蛋白的融合表达载体，通过烟草瞬时表达亚细胞定位发现，定位于细胞核。此外，酵母自转录激活试验证明具有自转录活性，且转录活性结构域位于的末端。结果表明，基因在橡胶的各种组织都有表达，但创伤对表达无明显影响，说明基因在茉莉酸信号途径的调控不是通过自身的转录调控，可能是通过转录后或翻译后调控等其他调控途径。转录因子通常会形成同源或异源二聚体后才与结合来调控基因的转录，酵母双杂结果显示可与自身形成同源二聚体，全长的或的末端能与

6、蛋白互作形成异源二聚体，但蛋白的全长或部分结构域都不能与互作。为了筛选调控的目标基因，我们首先通过酵母申杂实验分析转录因子与产排胶相关的、基因的启动子，以及茉莉酸顺式作用元件之间可能发生的互作，结果表明未与这些序列发生互作，调控的目标基因的筛选在后续的试验中将继续寻找。关键词：；互作验证；；功能鉴定AbstractDifferentiationandquantityofsecondarylaticiferdirectlyafecttheproductionoflatex.Jasmonicacidisthekeyhormonethatinduceslaticiferdifferen

7、tiationandlatexsynthesisinHeveabrasiliensis.JAZproteinisoneofimportantnegativefactorofJAsignalingpathway,whichregulatesthedownstreamgeneexpression.IdentificationofJAZtargetproteinsisashortcuttorevealthemechanismoflaticiferdifferentiationandru