山黧豆神经性中毒的细胞信号途径及分子机理研究

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1、分类号：密级：Ｗ鴻乂Ｉ研究生学位论文山驚豆神经性中毒的细胞信号途径及分子机论文题目（中文）理研究Ｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎａｔｈｗａｙａｎｄｐ＂论文题目（外文）ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｎｅｕｒｏｌａｔｈｒｉｓｍｙ研究生姓名谭瑞現？学科、专业生物学生态学研究方向细胞生物学／分子生态学学位级别硕主导师姓名、职称熊友才教授论文工作起止年月２０１２年９月至２０１５年６月论文提交日期２０１５年４月论文答辩日期２０１５年６月＇学

2、位授予日期；式？校化：甘肃省兰州市ｉ原创巧声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进巧研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，。均己明确注明出处除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研巧成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名也＞１；司：呼句日期：坪《句关于学位论文使用授权的声明。本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学本

3、人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文、使用学位论文或与该。本人离校后发表论文直接相关的学术论文或成果时一，第署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研究内容：么开□不宜公开，已在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一Ｖ（请在Ｗ上选项肉选择其中项打）韦茄＾论文作者签名：辜导师签名；１（３１日親日期；兴已年Ｍ

4、中文巧要山驚豆（￡如吟ＨｉＳＭ化ｏ＾ｓＬ．）是优良的旱地作物种质资源，长期过量食用会ｅｕ一导致人畜神经性山驚豆中毒（Ｎｒｏｌａｔｈｙｒｉｓｍ）。神经性山薰豆中毒是种由－ＯＤＡＰ引起的人畜神经退行性疾病Ｐ，但其细胞及分子机理尚不明确。本研究采用离体培养的人神经胶质瘤细胞系Ｍ０５９Ｋ作为实验体系，Ｗ谷氨酸为对照，采－ＯＤＡＰ用从山黨豆种子提取纯的Ｐ，使用浓度梯度的药物处理细胞，通过分析细、、胞存活力与生长动态确定加药浓度，利用流式细胞术共聚焦显徹术免疫细胞－ＯＤＡＰ对细胞増殖力化学和转录组测序等相关技术追踪检测Ｐ、细胞形态与细胞周期的

5、变化、细胞死亡方式与ＤＮＡ损伤、线粒体膜电位与细胞骨架、巧稳态调节状况和基因差异表达的动态方面对细胞的影响的。最终通过经典数理统计、虽微实证和分子表达路径分析方法，主要得出如下结果：－１０－ＯＤＡＰ１．ＴＴ实验２２２ｍＭ通过Ｍ，用共个浓度梯度Ｐ及Ｇ山处理细胞后测’＝，ＩＣ１．７得的０Ｄ值绘制细胞抑制曲线，计算得到半抑制浓度５〇７０ｍＭ，为了更１０ｌｕ，好地模拟体外中毒的过程，避免Ｇ对细胞产生毒性作用干扰研究确定将ｍＭ－０ＤＡＰ造成的细胞抑制药物浓度作为本研巧的相关实验的施加剂量，此时Ｐ率为２４．６％，Ｇ山为０．２％。２－ＩＴｅ．毒

6、素Ｐ０ＤＡＰ处理细胞，使用ＦＣ标记的ＡｎｎｘｉｎＶ作为探针利巧流式细胞术检测后发现，细胞并未出现显著的调亡现象，不同药物化理时间下调亡细胞比一例均低于２％：进步通过流式细胞术检测，未发现细胞周期阻滞现象：免疫组化实验检测ＤＮＡ断裂状况一，未发现明显的ＤＮＡ损伤；进步通过流式细胞术检测，未发现细胞周期阻滞现象；免疫沮化实验检测ＤＮＡ断裂状况，未发现明显的ＤＮＡ损伤－，细胞克隆形成实验结果显示，Ｐ０ＤＡＰ可抑制细胞增殖，显著降低克隆形成；－－ＴｒａＭ３－ｕｏ３ｃｋｅｒ７５１２分别标记．毒素Ｐ０ＤＡＰ处理细胞后，使用ＦｌＡＭ及Ｍｉｔ

7、ｏ二－细胞内巧离子和线粒体，利用免疫组化实验观测者变化，０ＤＡＰ。结果发现Ｐ处理６ｈ后便可使细胞内巧离子持续増多并被线粒体吸收，这种现象随处理时间延长而加剧，化理２４ｈ后部分细胞中线粒体失活。而Ｇｌｕ处理后巧离子增加速－ｏ度低于０ＤＡＰ组；使用Ｒｈｌ２３作为指示剂，流式细胞术检测线粒体膜电位也ＰＩ－ＯＤＡＰ引起的持续性膜电位下降观测到Ｐ。４－．毒素ＰＯＤＡＰ处理显著性地破坏细胞骨架。毒素处理细胞后，使用鬼笔环肤－标记细胞骨架，ＯＤＡＰ可影响细胞骨架观测结果显示Ｐｆ重变形現塌，绿色英光Ｆ－ａｃｔｎ强度明显减弱，ｉ聚合体发生翻转和折

8、叠，与细胞