夏蜡梅组织培养技术研究

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1、分类号S685.99学位代码309密级学校代码10298学号3120497南京林业大学硕士研究生学位论文论文题目：夏蜡梅组织培养技术研究作者：孙姿专业：园林植物与观赏园艺研究方向：园林植物应用指导教师：芦建国教授二〇一五年六月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经特别注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式注明并表示感谢。本人完全意识到本声明的法律结杲由本人承担。学位论文作者(本人签名):学位论文出版

2、授权书本人及导师完全同意《中国博士学位论文全文数据库出版章程》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库出版章程》（以下简称“章程”，见WWW.cnki.net)，愿意将本人的学位论文提交“中国学术期刊（光盘版）电子杂志社”在《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》中全文发表和以电子、网络形式公开出版，并同意编入CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播，同意按“章程”规定享受相关权益。论文密级：@开□保密（_年_月至_年__月）（保密的嗲像疮式在斛密后裘遂守此你试）年从吣年6月日致谢时光飞逝，研究生生活即将结束，回首三年

3、中的点点滴滴，感慨良多。导师芦建国教授严谨认真的学术态度、一丝不苟的工作作风和对学生的高度责任感给了我很大的影响，从学识上、人生上都给予我以极大的启迪，是值得终身收藏的财富。从论文的选题、试验材料的准备、试验方案的制定乃至论文的最终完成，都得到了导师的悉心指导，最终才完成了本论文，值此论文即将付梓之际，向导师致以真诚的谢意。在本研究的立题、试验过程中，承蒙南京林业大学胡凤荣、丁彦芬、耿兴敏等老师的热心指导，并提出许多宝贵的意见。同时试验实施过程中得到了园林植物实验室王菲彬老师和高强老师的大力支持以及师姐纪凯婷、朱琳、李超、吴影倩、展晶、师兄金建邦等在试验中给予无私热情的帮助，在此谨表

4、诚挚谢意。此外，要感谢我的同学张振玲、谌金芳、赵红娟、何晓冰、冉冰、施曼、程龙霞、孟玲玲、凌敏、王萍、冯洁、周程、施婷婷、张利、吴秀臣等在试验过程中的无私帮助和精神鼓励；感谢室友王晓丹、林秀灵、朱晓芸在试验实施、数据处理与论文撰写中与我并肩作战，帮我分忧解难；同时，也非常感谢我的朋友赵洋给予我莫大的帮助、鼓励和支持。最后谨向所有帮助、关心和支持过我的人再次表示诚挚的谢意！作者：孙姿二○一五年六月于南林摘要夏蜡梅（Calycanthuschinensis），蜡梅科（Calycanthaceae）夏蜡梅属（Calycanthus）落叶灌木，观赏价值较高，叶片具药用价值。目前，夏蜡梅的研究

5、主要集中在保护生物学、群落特征、遗传多样性、栽培育种等方面。本文以夏蜡梅种子、茎尖为外植体，进行离体培养，获得完整植株，同时以无菌苗叶片为外植体，诱导愈伤组织，并对愈伤分化过程中出现的褐变现象进行研究，旨在获得夏蜡梅的离体快繁体系，加速夏蜡梅的推广应用。主要结论如下：1.直接发生途径，以夏蜡梅离体种子、茎尖为外植体进行试验。（1）75%酒精20~30s+0.1%升汞处理7min时，离体种子灭菌效果最好；75%酒精20~30s+0.1%升汞处理10min时，茎尖灭菌效果最好，褐化率、污染率均相对较低，萌发率较高。（2）WPM培养基为夏蜡梅种子离体培养，茎尖离体培养最适基本培养基，试管苗

6、叶色嫩绿，茎粗壮，生长状态较好。添加0.2mg/l6-BA可促进夏蜡梅种子无菌苗的生长。（3）6-BA、ZT均可诱导茎尖萌发。6-BA最佳浓度为2.0mg/l，诱导率和繁殖系数分别为97.06%、2.41；ZT浓度为2.0mg/l或4.0mg/l均可，浓度为2.0mg/l时，诱导率和繁殖系数分别为97.50%、2.50。WPM+2.0mg/l6-BA+0.05mg/lNAA是茎尖萌发诱导最佳组合，诱导率和繁殖系数分别为89.50%、2.29。（4）6-BA、ZT、TDZ附加0.05mg/lIBA均可诱导夏蜡梅试管苗分化增殖。6-BA浓度为2.0mg/l时无菌茎段增殖效果最好，增殖率为

7、98.15，增殖系数为3.16，浓度为4.0mg/l时试管苗整株增殖效果最好。ZT浓度为2.0mg/l或4.0mg/l，TDZ浓度为0.1mg/l时试管苗增殖效果最好。WPM+2.0mg/l6-BA+1.0mg/lKT+0.1mg/lNAA是夏蜡梅无菌茎段增殖正交试验中最佳组合，增殖率达100%，增殖系数为2.60。（5）继代3次，不定芽增殖率和增殖系数达到最高，增殖效果最佳。（6）1/2MS为诱导夏蜡梅试管苗生根最适基本培养基，附加0.5mg/lIBA时