ph和温度对毛蚶蛋白酶和淀粉酶影响的初步研究分析-畜牧渔业

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1、个人收集整理仅供参考学习pH和温度对毛蚶蛋白酶和淀粉酶影响地初步研究-畜牧渔业论文pH和温度对毛蚶蛋白酶和淀粉酶影响地初步研究王英光，周海龙（滦南县水产技术推广站，河北滦南063500）1材料与方法1.1样品采集在农贸市场购买新鲜地活毛蚶10只，选取体型较大地毛蚶：每只体长5～6cm以上，整重40g以上.1.2粗酶提取液制备1.2.1蛋白酶粗酶提取液制备取成年健康样品毛蚶5只，测定其形态特征（体长、体宽、体高、重量），如表1所示.（5组平行实验，每组1只）.9/9个人收集整理仅供参考学习将表1中地5只实验毛蚶在冰块上解剖，用解剖针打开毛蚶，切断其闭合肌，由于肝胰脏包裹着胃部，遂剖开肝胰脏后

2、找到胃部，再剖开胃部，用解剖针刮出其胃部内容物，再取肝胰脏混合物.取2支小试管，编号1，2，称重1号：18.82g，2号：16.87g，将从肝胰脏中取出地内容物放入1号试管中，将从胃部中取出地内容物放入2号试管中，加入样本后地重量是1号：19.83g，2号：17.54g，所以，所得地肝胰脏样本质量为1.01g，胃部内容物质量为0.67g，所得样品分别在冰水浴中捣碎，匀浆，匀浆完成后转移回原试管，在0～4℃下抽提20～24h.冷冻离心20min(10000r/min)获得组织匀浆上清液即为粗酶提取液，置于4℃条件下保存，并于24h内分析完毕.1.2.2淀粉酶粗酶提取液制备取剩余地成年健康样品

3、毛蚶5只，测定其形态特征（体长、体宽、体高、重量），如表2所示.（5组平行实验，每组1只）.将表2中地5只实验毛蚶在冰块上解剖，用解剖针打开毛蚶，切断其闭合肌，由于肝胰脏包裹着胃部，遂剖开肝胰脏后找到胃部，再剖开胃部，用解剖针刮出其胃部内容物，再取肝胰脏混合物.取2支小试管，编号1，2，称重1号：16.92g，2号：17.03g，将从肝胰脏中取出地内容物放入1号试管中，将从胃部中取出地内容物放入2号试管中，加入样本后地重量是1号：17.92g，2号：18.35g，所以，所得地肝胰脏样本质量为1.00g，胃部内容物质量为1.32g，所得样品分别在冰水浴中捣碎，匀浆，匀浆完成后转移回原试管，在

4、0～49/9个人收集整理仅供参考学习℃下抽提20～24h.冷冻离心20min(10000r/min)获得组织匀浆上清液即为粗酶提取液，置于4℃条件下保存，并于24h内分析完毕.2结果2.1pH对蛋白酶地影响取出冷藏地肝胰脏及胃粗酶提取液，取18支试管，分为A、B两组，每组9支试管，分别标号1～9，A组为肝胰脏粗酶提取液，B组为胃粗酶提取液.做pH系列，分别加入pH为5.5～9.5地2%酪蛋白溶液10mL做底物.在各组1～9号管中分别加入粗酶提取液0.1mL，迅速混匀，将18支试管立即放入30℃水浴锅中反应，准确计时30min，立即各加入0.4mol/LTCA溶液2mL，终止反应.将反应液于

5、6000r/min下离心5min，取上清，在260nm处测定吸光值.如表3所示.结论：以上数据表明，毛蚶肝胰脏内蛋白酶适宜pH接近于6，胃内蛋白酶适宜pH在5.5～6之间.2.2温度对蛋白酶地影响温度梯度用2%酪蛋白配制：准确称取酸水解酪蛋白2g，置于100mL烧杯中，加少量水溶解，可微加热帮助溶解，待溶解完全，转移至1009/9个人收集整理仅供参考学习mL容量瓶，定容.取12支试管，分为A、B两组，每组6支试管分别标号1～6，A组为肝胰脏粗酶提取液，B组为胃粗酶提取液.做温度系列，分别加入10mL温度梯度用2%酪蛋白溶液做底物.在各组1～6号管中分别加入粗酶提取液0.1mL.迅速混匀，将

6、12支试管立即放入温度分别为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃水浴锅中反应，准确计时30min，立即各加入0.4mol/LTCA溶液2mL，终止反应.将反应液于6000r/min下离心5min，4℃取上清在260nm处测定吸光值.如表4所示.结论：肝胰脏内蛋白酶地适宜温度在25℃左右，胃内蛋白酶适宜温度在20～25℃.2.3pH对淀粉酶地影响取出冷藏地肝胰脏及胃粗酶提取液，取18支试管，分为A、B两组，每组9支试管，分别标号1～9，A组为肝胰脏粗酶提取液，B组为胃粗酶提取液.做pH系列，分别加入pH为5.5～9.5地磷酸缓冲液淀粉底物10mL.在各组1～9号管中分别加入粗酶提取

7、液0.5mL，28℃恒温反应30min，然后置于水浴锅中煮沸10min，终止反应，加入0.1mL碘液测得以下吸光度.如表5所示.9/9个人收集整理仅供参考学习结论：以上数据表明毛蚶肝胰脏内淀粉酶适宜pH接近于6.5，胃内淀粉酶地pH适宜在5.5～6之间.2.4温度对淀粉酶地影响取出冷藏地肝胰脏及胃粗酶提取液，取12支试管，分为A、B两组，每组6支试管分别标号1～6，A组为肝胰脏粗酶提取液，B组为胃粗酶提取液.做温度系列，