四倍体异育银鲫额外染色体组来源的鉴定

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1、分类号Ｓ９６学号２０１３８１３０３４為音泉違义每硕主学位论文四倍体异育银郷额外染色体组来源的鉴定童苗苗指导教师李忠副研究员专业学位农＃推广硕±研巧领域渔业研究方向鱼类遗传育种答辩日期二〇—五年五月ＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＥＸＴＲＡＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＤＥＲＩＶＥＩＮＴＨＥＮＥＷＴＥＴＲＡＰＬＯＩＤＧＩＢＥＬＣＡＲＰＢｙＴＯＮＧＭｉａｏｍｉａｏＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬＩＺｈｏｎｇＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒ

2、ｓｉｔｊｇｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＥｘｔｅｎｓｉｏｎＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＮａｎｉｎＣｈｉｎａｊｇ，Ｍａｙ２０１５研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的巧容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明。本人完全意识到

3、本声明的法律结果由本人承担。憂学位论文作者签名：％斋年＆月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密妒＂＂请在上方框内打Ｖ（）学位论文作者签名：４音年＾月＾曰足导师签名７：４ｙＬｒ年６月１日■＂命＜３足、目录０＾Ｉ摘要

4、ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＨＩ一第：ｔ综述１前Ｂ１１多倍体育种的研巧１．１１多倍体现象１１．２鱼类多倍体育种２２银御的生殖方式与倍性研巧４２．１银御的分类学地位及生物学持性４２．２雌核生殖及银御发育生物学６２１．３银御的多倍化０３微卫星标记（ＳＳＲ）１３４内转录间隔序列（ＩＴＳ）１４４１ＩＴ４．Ｓ醒成１４．２ＩＴＳ的研船用１５５目的及育种意义１５第二章异育银御四倍体染色体组来源的ＳＳＲ分析１７１Ｍ料与方法１７Ｕ实验材料１７１．２基因组ＤＮＡ的提取１７１．３ＰＣＲ１８

5、扩增１．４微卫星引物１８１．５聚丙滿新胺凝胶电泳１８１．６巧丙締酥胺凝胶ＰＣＲ产物纯化回收１９１．７ＰＣＲ产物的连接反应２０１．８感受态细胞的制备２０１．９转ｆｔ２１１１０．测序鉴定２１２结Ｓ２２２．１引筛选结果与分析２２２．２微卫星测序结果的分析３０第Ｈ章异育银郷四倍体打Ｓ序列的克隆分析３３１材料与方法巧１．１实验材料３３ｉ异育银郷四倍体额外染色体组来源的鉴定１巧．２基因组ＤＮＡ的提取１．３ＰＣＲ３３扩增１．４ＩＴＳ１引物设计合成３４１３．５琼脂糖凝胶电泳检测４１．６

6、ＰＣＲ产物的切胶回收３４１．７ＰＣＲ产物的连接反应３５１乂感受态细胞的制备３５１．９转Ａ３５１．１０测序鉴定３５２结果Ｓ分析３５３综合讨论４３３．１异育银御四倍体额外染色体的来源４３３．２银御的生殖方式与多倍体发生４４全文総４７参考规４９附录５５致谢６１摘要异育银卿四倍体额外染色体组来源的鉴定摘要卸是一种经济效益高的灾木养殖品种五倍体如彭泽，我国主要养殖的卸鱼多为，卸、异育银鄉等自然界中仅有少数四倍体郵存在。我们在王倍体异育银卸选育王作，中发现一种具有显著生长优势的异育银辦六代的系统选育已得

7、到，对其进行连续，，品种经倍性分析和ＤＮＡ含量检测证明选育异育银卸是染色体具有稳定形态特征新，数为２０８条的四倍体卸。然而，目前对于这种四倍体银卸的形成机制Ｗ及它额外染色体形成的原因尚不清楚，是由于染色体加倍而来还是外源染色体的整合需要确切的证据。本实验主要运用分子生物学手段对新选育异育银卿四倍体染色体来源进行鉴定，其鉴定方法及结果如下：一１、微卫星ＤＮＡ（ＳＳＲ），是种可