千金藤碱对lps诱发的乳腺炎小鼠的保护效果及其机制的初步研究

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1、千金藤碱对LPS诱发的乳腺炎小鼠的保护效果及其机制的初步研究TheprotectiveeffectandmechanismsofCepharanthineonLPS-inducedmastitisinmice作者姓名：周二顺专业名称：临床兽医学学位类别：农学硕士指导教师：杨正涛副教授论文答辩日期：2015年6月5日中文摘要千金藤碱对LPS诱发的乳腺炎小鼠的保护效果及其机制的初步研究乳腺炎是乳腺组织遭受多种病原微生物如细菌、支原体、酵母菌、藻类等感染引起的一种急性或慢性炎症性疾病。在奶牛养殖场中，乳腺炎的爆发可导致产奶量的大幅下降，同时严重影响原乳品质，应用抗生素治疗

2、尽管治疗效果确切，但休药期原乳废弃也会造成巨大的经济损失，同时极易引起耐药菌株的出现，严重威胁消费者的健康。在兽医临床实践中，对奶牛乳腺炎的防治亟需开发新型安全的治疗药物。千金藤碱是一种从中国传统中草药防己科千金藤属植物中提取分离出来的双苄基异喹啉类生物碱，其具有多种生物功能，如抗炎、抑菌、增强免疫功能等，被广泛地用于治疗各种急慢性疾病，而且毒副作用低。LPS是革兰氏阴性菌细胞外膜中的一种重要活性成分，据报道利用LPS灌注乳导管所建立的乳腺炎动物模型与奶牛临床型乳腺炎非常相似，可用于奶牛乳腺炎防治药物的实验室研究。本论文以千金藤碱为研究对象，通过体内外实验，研究千金

3、藤碱对LPS诱导的乳腺炎小鼠的保护作用及机制，为临床上应用千金藤碱治疗乳腺炎提供实验依据。首先，我们观察了千金藤碱对LPS诱发的乳腺炎小鼠的保护作用。将泌乳母鼠随机分为6组，即：空白对照组、LPS组、千金藤碱（2.5、5、10mg/kg）+LPS组、DEX（5mg/kg）+LPS组。千金藤碱组和DEX组母鼠在乳导管单独灌注LPS前1h和灌注后12h分别腹腔注射给药一次；空白组和LPS组母鼠腹腔注射相同体积的PBS溶液。通过制作病理组织切片、MPO活性检测、炎性细胞因子检测等方法，观察千金藤碱预处理对LPS诱发的乳腺炎小鼠的的保护效果。结果显示，千金藤碱能降低乳腺组织

4、中MPO活性和TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平，而且能抑制p65磷酸化和IκB降解，改善乳腺组织的病理变化。这些结果表明千金藤碱在LPS诱发的乳腺炎小鼠中发挥了有效的抗炎作用，对小鼠起到了保护作用。其次，为了进一步验证千金藤碱对乳腺炎小鼠的保护作用，我们通过原代培I养小鼠乳腺上皮细胞，研究千金藤碱的抗炎作用，并初步探索其作用机制。首先通过MTT法检测了千金藤碱对小鼠乳腺上皮细胞的活性影响，然后用ELISA法测定了千金藤碱对LPS刺激的小鼠乳腺上皮细胞中细胞因子的影响，最后用Westernblot检测分析了千金藤碱对小鼠乳腺上皮细胞中NF-κB和Akt信号

5、通路的影响。结果显示，千金藤碱（2.5～10μg/mL）对小鼠乳腺上皮细胞的活性无影响，对细胞因子TNF-α和IL-6的蛋白水平有明显的下调作用，特别是浓度为10μg/mL的千金藤碱，能显著的降低TNF-α和IL-6的蛋白表达水平。另外，千金藤碱能够降低p65和IκB的磷酸化水平，抑制Akt蛋白激活。综上所述，我们验证了千金藤碱能够凭借其有效的抗炎作用对LPS诱发的乳腺炎小鼠起到良好的保护作用，并初步证实千金藤碱抗炎作用机制是通过调节Akt/NF-κB信号通路来实现的。关键词：乳腺炎；脂多糖；千金藤碱；小鼠乳腺上皮细胞；NF-κB；AktIIAbstractThep

6、rotectiveeffectandmechanismsofcepharanthineonLPS-inducedmastitisinmiceMastitis,definedastheinflammationofthemammarygland,isamajordiseasethataffectsthedairyindustry.Anumberoforganisms,includingbacteria,mycoplasma,yeasts,andalgae,areinvolvedinthedisease.Mastitisdecreasesmilkproductionand

7、reducesmilkquality,whichfinanciallyimpactsdairyproducersandaffectsthequalityofmilkavailabletotheconsumer.Currently,conventionalmethodsareunabletopreventthemammaryinfection.Therefore,thedevelopmentofnoveltherapiesformastitisisurgentlyneeded.Cepharanthine(CEP),abiscoclaurinealkaloidiso