分枝杆菌脂质组分加强结核亚单位疫苗效应的初步研宄

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1、ｙ分类号ｓＲ３９２密级：公开為Ｗ乂Ｉ研究生学位论文分枝杆菌脂质组分加强结核亚单位疫苗效论文题目（中文）应的初步研究ＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌＬｉｐｉｄＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ论文题目（外文）Ｅｎｈａｎｃｅｄ化ｅＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｉｃａ巧ｏｆＴｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＳｕｂｕｎｉｔＶａｃｃｉｎｅ研究生姓名何珊珊学料、专业基础医学免疫学Ｉ：研巧方向学位级别硕±导师姓名、职称谭继英教授祝秉东教授论文工作２０１３

2、年３月至２０１５年４月起止年月论文提交日期２０巧年４月论文答辩日期２０巧年５月学位授予日期２０１５年６月校址：甘肃省兰州市原创性声明：本人郑重声明本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均己明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。

3、论文作者签名：何棘种日期：从化．＾３关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检。、索，可１＾采用任何复制手段保存和汇编本学位论文本人离校后发表使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时一，第署名单位仍然为兰州大学。

4、本学位论文研究内容：□可！＾公开□不易公开，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一Ｖ（请在上选项内选择其中项打）／口论文作者签名：＇了导师签名；秘綠所ｆ辦、＿王。！＞飞日期；心如《期：瓜／日Ｉ分枝杆菌脂质组分加强结核亚单位疫苗效应的初步研究摘要一些组分具有抗原性目的：分枝杆菌细胞壁含丰富的脂质组分，其中的，或具有重要的免疫调节作用。本实验通过筛选分枝杆菌细胞壁脂质成分中具有抗结核作用的组分并初步研巧这些脂质组分在结核亚单位疫苗中的作用，

5、为后续研发有效的结核亚单位疫苗做准备。方法；本研究用有机溶剂对卡介苗（ＢＣＧ）细胞壁总脂成分进行萃取，用桂胶柱色谱法将其分离为非极性脂、中间极性脂和极性脂。酶联免疫吸附试验巧ＵＳＡ检测各类脂质组分在人群中的免疫原性，酶联免疫斑点实验（ＥＬＩＳＰＯＴ））检测各类脂质组分对人群Ｔ细胞的免疫反应，并将总脂和各类脂质组分分别与佐一－剂二甲基王十六焼基较（ＤＤＡ）聚肌胞（Ｐｏ：］ｙＩＣ）混合，进步与结核分枝－Ａ－ＭＰＴ－－７０杆茜融合蛋白ＬＴ７０（ＥＳＡＴ６８５Ｂ６４．民ｖ２６２６ｃｇＭ

6、化８．４，简称ＬＴ）ｉ９〇ｉ９８混合，构建含脂质的结核亚单位疫苗，分别在在小鼠ＢＣＧ攻击模型和家兔皮肤ＢＣＧ攻击结核液化模型中进行保护效率评价。利用小鼠ＢＣＧ攻击模型的保护效率评价，包括进行ＢＣＧ初免后含脂质亚单位疫苗的强化免疫保护效率评价。单－独疫苗免疫策略组，用ＬＴ７０脂质疫苗在０、３、６周时连续免疫ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠Ｈ次－Ｃ；ＢＣＧ初免含脂质亚单位疫苗加强策略组，用ＢＣＧ在０周时免疫ＢＡＢＬ／一ＬＴ－１ＢＡＢＬ小鼠次，再用７０脂质疫苗在９、２周时加强免疫／Ｃ小鼠两次。两种策略

7、均用ＢＣＧ和碟酸缓冲液（ＰＢＳ）免疫组为对照组。末次免疫后５周，滴鼻感染小鼠７０－，３周后检测小鼠肺脏ＢＣＧ菌载量，此评价ＬＴ脂质疫苗的保护效率和强化免疫保护效率。利用家兔皮肤结核液化模型评价研究含脂质亚单位疫苗－保护效率，用ＬＴ７０脂质疫苗在０６，、３、周时连续免疫家兔Ｈ次ＢＣＧ组在０—周时免疫ＢＣＧ次，ＰＢＳ免疫沮为对照。末次免疫后６周，家兔腹背部皮内注射ＢＣＧ，形成家兔皮肤结核感染病灶。每天观察感染灶结节的出现及病理发展过程，测量结核结节的大小及记录结核结节到达肉芽肿、破溃、液化

8、高峰及愈合的时间，当结节到达液化高峰时收集各组家兔皮肤结核结节中的液化物质，对其中的结核菌载量进行计数－，评价ＬＴ７０脂质疫苗的保护效率。结果：结核病患者脂质特异性抗体ＩｇＧ高于健康人群（户＜０．０５）。在小鼠－卡介苗攻击模型免疫保护效果评价中，含脂质亚单位疫苗ＬＴ７０总脂组小鼠肺＜化０５－部荷菌数明显低于ＢＣＧ组（＾）。在ＢＣＧ初免含脂质亚单位疫苗加强免Ｔ－－＜疫策略中