凝血酶激活的血小板促进人外周血cd4~+t细胞向tfh分化

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1、授予单位代码10089m学号或申请号20123187HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位凝血酶激活的血小板促进人外周血CD4+T细胞向Tfh分化研究生：谷斌导师：李中信教授专业：外科学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指^导小组）的指导下，由本人独立完成。本

2、

3、位论文研宄所获得的研宂成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北_科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主.要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试

4、验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担t相痹法律责任。‘4泰研宄生签名治导师签章：二级学院领_章：伞河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：年>月0日目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………3英文缩写....

5、...................................................................................6+研究论文凝血酶激活的血小板促进人外周血CD4T细胞向Tfh分化前言……………………………………………………………………7材料与方法……………………………………………………………8结果……………………………………………………………………15附图……………………………………………………………………17讨论………………………………………………………………23结论…

6、…………………………………………………………………25参考文献………………………………………………………………26综述血小板及Tfh与肿瘤关系的研究进展………………………31致谢…………………………………………………………………………45个人简历……………………………………………………………………46中文摘要+凝血酶激活的血小板促进人外周血CD4T细胞向Tfh分化摘要+目的：观察凝血酶激活的血小板对人外周血CD4T细胞向Tfh分化的影响。方法：+1CD4T细胞的提取、纯度验证及激活抽取健康青年男性外周血（n=5），梯度密度离

7、心法提取外周血单个+核细胞（PBMC）；将提取的PBMC用免疫磁珠方法分选出CD4T细胞；+流式细胞术鉴定CD4T细胞分离纯度；CD3/CD28联合抗体激活分选出++的CD4T细胞；流式细胞术检测激活后CD4T细胞CD69表达。2血小板的提取及激活抽取健康青年男性外周血（n=5），二次离心法提取血小板；凝血酶（0.2U/ml，37℃，5min）激活提取的血小板；流式细胞术检测激活后血小板CD62P表达。+3血小板与CD4T细胞共培养+分别将激活的CD4T细胞按照如下分组进行培养：A血小板组：激++活血小板+CD4T细胞；B上

8、清组：激活的血小板上清液+CD4T细胞；C+对照组：单纯培养基+CD4T细胞。+4观察CD4T细胞形态变化；共培养72h后收集培养基，ELISA法检测IL-10表达。分别以CD4、PD-1、CXCR5、FoxP3流式抗体标记共++++-培养后的CD4T细胞，检测各组中Tfh（CD4PD-1CXCR5Foxp3）占+CD4T细胞比例。结果：+1CD4T细胞磁珠分选纯度鉴定及激活状态检测：流式细胞术验证磁++珠分选CD4T细胞纯度为（95.93±2.14）％。流式细胞术检测CD4T细胞激活后CD69表达情况，激活组（13.05±

9、2.12）％，明显高于未激活组（1.48±0.25）％，有统计学差异（P＜0.01）。2血小板激活状态检测：凝血酶（0.2U/ml，37℃，5min）激活血小板后，血小板表面CD62P阳性表达情况为凝血酶组（46.27±2.58）％明显1中文摘要高于未激活组（10.29±0.44），有统计学差异（P＜0.05）。+3激活后的血小板同激活后的CD4T细胞共培养后，镜下观察，与+上清组及对照组相比，血小板组CD4T细胞表现出明显的细胞聚集性。4ELISA法检测共培养72h后培养基中IL-10的含量，其中血小板组IL-10含量为（

10、60.77±7.59）pg/ml，明显高于上清组（14.08±2.78）pg/ml及对照组（11.24±2.81）pg/ml，有统计学差异（P＜0.05）；而上清组与对照组无统计学差异。+5流式细胞术检测CD4T细胞CD4、PD-1、CXCR5、FoxP3表达情+况，其中血小板组Tfh占C