偶联双基因靶点gnrs对tnbc放疗增敏作用及其机制研究

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1、上海交通大学硕士学位论文偶联双基因靶点GNRs对TNBC放疗增敏作用及其机制研究学生姓名：李冰馨学号：1127259572指导老师：傅深教授学科专业：肿瘤学研究方向：肿瘤放射生物学培养单位：上海市第六人民医院答辩日期：2015年4月28日DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityforMasterofMedicineTheimpactandmechanismofgoldnanoparticlesconjugatedwithdual-targetinhibitorsontheradiosensitivityoftriple-negati

2、vebreastcancercellAuthor:BingxinLiStudentIDNo.：1127259572Advisor:ShenFuSpecialty:OncologyDirection:RadiationbiologyTrainingUnit:ShanghaiSixthPeople’sHospitalSubmittingDate:2015-4-28上海交通大学硕士学位论文3上海交通大学硕±学位论文■上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留，、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允

3、许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在＿＿年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密囚。＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）＾指导教师签名；学位论文作者签名；居钱知令上海交通大学硕士学位论文中文摘要偶联双基因靶点的金纳米颗粒对三阴性乳腺癌细胞放疗增敏作用及其相关机制的研究背景与目的三阴性乳腺癌（triple-negativebreastcancer，TNBC）作为乳腺癌分子亚型的一个分型，其分子及生物学行为具有多方面特殊性，并且具有放射敏感异质

4、性。其存在多个分子靶点的异常，这些异常分子靶点可通过不同机制影响肿瘤对电离辐射的反应，从而调节TNBC的放疗敏感性。如何提高其放射治疗敏感性和增益比成为TNBC放射治疗的瓶颈。我们设计并构建偶联整合素αvβ3特异性结合肽RGD及血管内皮生长因子受体（vascularendothelialgrowthfactorreceptor，VEGFR）特异性抑制剂TKI-258双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）作为增敏剂，观察在6MV-X线照射下TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD对TNBC细胞株MDA-MB-231细胞的放射敏感性的影响，并探讨

5、其可能存在的机制。材料与方法本课题设计并构建了一种新型的基于介孔二氧化硅包覆的金纳米棒颗粒，并通过表面化学修饰法偶联整合素αvβ3特异性结合肽RGD及血管内皮生长因子受体（VEGFR）特异性抑制剂TKI-258，使该多功能金纳米棒颗粒成为一种特异性的靶向放疗增敏材料。以人TNBC细胞株MDA-MB-231细胞和人乳腺癌细胞I上海交通大学硕士学位论文株MCF-7细胞为研究对象，利用MTT法及CCK-8法检测偶联双基因靶点多功能金纳米棒颗粒的细胞毒性；透射电子显微镜观察偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒进入细胞的情况；采用6MV-X线照射偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒温育后的肿瘤细胞，克隆

6、形成实验检测细胞的放射敏感性改变；流式细胞仪分析细胞凋亡、细胞周期及整合素αvβ3表达水平的改变；Westernblot实验检测VEGFR的表达水平改变。结果1.采用种子诱导生长法合成均一的裸金纳米棒颗粒（GNRs），并通过表面包覆二氧化硅（SiO2）及表面聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)修饰，成功构建偶联RGD及TKI-258双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）。2.透射电子显微镜显示偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒分散均一，表面硅层厚19.39nm+1.63nm，镜下可见介孔结构，并可通过细胞内吞作用进入MDA-MB

7、-231细胞和MCF-7细胞胞质内。紫外分光光度计检测多功能金纳米金棒颗粒吸收峰位于515、860nm处，偶联的双基因靶点抑制剂TKI-258、RGD分别在360、204nm处有特征性吸收峰。3.偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒在0-100μg/mL浓度范围内对MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的生物学活性无明显影响(p>0.05)，细胞毒性评级为I级，IC50值434.63μg/mL。4.流式细胞仪检测细胞表面