侧柏古树组织培养再生及其端粒相关基因克隆研究

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1、分类号S722密级公开UDC学位论文侧柏古树组织培养再生及其端粒相关基因克隆研究ResearchesonTissueCultureofOldPlatycladusOrientalisandCloningRelevantGenesofTelomere赵育新指导教师姓名江泽平研究员申请学位级别硕士专业学位专业名称风景园林研究方向园林植物论文提交日期2015年5月论文答辩日期2015年6月学位授予日期2015年7月答辩委员会主席孟平评阅人北京·中国林业科学研究院学位论文侧柏古树组织培养再生及其端粒相关基因克隆研究学位论文作者赵育新指导教师姓名江泽平研究员指导小组

2、成员常二梅史胜青副研究员刘建锋副研究员申请学位级别硕士专业名称风景园林研究方向园林植物论文答辩日期2015年6月中国·北京DissertationfortheDegreeResearchesonTissueCultureofOldPlatycladusOrientalisandCloningRelevantGenesofTelomereCandidate:YuxinZhaoSupervisor:Prof.Dr.ZepingJiangAssociateSupervisor:Dr.ErmeiChangAssoc.Prof.Dr.ShengqingShiAsso

3、c.Prof.Dr.JianfengLiuAcademicDegreeAppliedfor:MasterofProfessionalDegreeSpeciality:LandscapeArchitectureDateofDefence:June,2015Degree-Conferring-Institution:ChineseAcademyofForestry独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加ｙｕ示注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含

4、为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。Ｉ学位论文作者签名：秦曰期可义年月曰＾負７３学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可将学位论文的全部或部分内容编入、有关数据库进行检索，可采用影印缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解

5、密后适用本授权书）学位论文作者签名；起焉朵导师签名；ｊ严月日月曰＾沪＾］７学位论文作者毕业联系方式摘要古树是独特的风景园林资源，是城市人文景观和自然景观的综合载体，但是古树面临不同程度衰老甚至死亡的问题，保护古树可以充分发挥其在园林绿化中的重要作用。为了保护古树景观资源，本文以陕西黄帝陵的侧柏古树为研究对象，以古树上当年生枝条茎尖为外植体，通过组织培养对古树进行克隆，完全保留了古树的性状；同时通过克隆端粒基因，在分子水平研究古树衰老，对古树复壮进行初步研究。主要的研究结果如下：1.灭菌方法的选择：通过对外植体灭菌方法的筛选发现，侧柏古树

6、外植体适宜的消毒方法是先用75%酒精处理30s，无菌水冲洗5次，然后用0.1%HgCl2消毒8min，此时的污染率最低，死亡率也最低，成活率最高，初步解决了侧柏古树的灭菌问题。2.初代培养基筛选：利用MS、1/2MS、B5、WPM与DKW5种基本培养基对侧柏古树的外植体进行组织培养，经一个月培养后发现，1/2MS培养基对侧柏古树嫩枝的组织培养有良好的效果，B5培养基诱导的效果比1/2MS稍差，诱导率低。MS、WPM与DKW培养基对外植体培养的效果都不理想，可能与培养基本身的营养有关。然后以1/2MS为基本培养基筛选出了NAA和6-BA适宜的使用浓度，最后得

7、出初代培养最适宜培养基为：1/2MS+0.2mg/LNAA+0.1mg/L6-BA。3.增殖培养基筛选：通过对不同基本培养基（MS、1/2MS、WPM、B5、DKW）和不同激素（6-BA、KT、NAA）组合的优化，增殖最适培养基为：1/2MS+0.05mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.1mg/LKT。4.生根培养基的筛选：内、外源激素的配比关系对不定根的形成起着决定性的作用。试验表明，在生根培养中WPM效果较1/2MS好，这与初代培养、增殖培养时明显不同。说明生根阶段所需要的营养物质有所不同，侧柏古树最适生根培养基为WPM+0.5mg/LNAA+

8、0.5mg/LIBA。5.三个端粒基因的克隆：应用RACE技术从侧