二化螟碱性神经酰胺酶和中性鞘磷脂酶生化特征及其生理功能研究

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1、分类号—§￡迄１？学号＾匪哩Ｌ．－．．掠為请泉毒义赛．．．．，．．硕壬学位论文？？二化慎碱性神经醜胺酶和中性銷踞脂酶生化特征及其生理功能研究叶丽华＇．．Ｎ．Ｘ，：：／；，．．＇－＇．．－Ｖ７＇；－．：－－；＂Ｔ—一＾，：：＇一。＇’’？．＾，三．－違品；Ｗ．、．；、、？＇、、：冷．＼；．＾ｔ：ｒ．？二？１＇指导教师方继朝研究员／／ＶＶ…？一－；？？■一－义■？．．Ｊ专业学

2、位农业推广硕±。．一＇１．．ｔ；，Ｉ１‘Ｘ＇．．．＇、．１研究领域植物保护ｆ．＇今．＇：ｒ—一．Ｖ．研究方向氷稻害虫综合防治．、？？答辩日期二〇—五年六月這贵今＇＞＇．＇公：一ｒ：／／、ｉ■＇＇话■＇－．‘．，：，＇－坏激夸听、＇■．？Ｖ：部終＇？．，‘．一．－－’。＇？、．二．／．．．＾‘＂二－二，苗，，病ＶＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＡＮＤＰＨＹＳＩＯＬＯＧ

3、ＩＣＡＬＦＵＮＣＴＩＯＮＯＦＴＨＥＣＨＩＬＯＳＵＰＰＲＥＳＳＡＬＩＳＡＬＫＡＬＩＮＥＣＥＲＡＭＩＤＡＳＥＡＮＤＮＥＵＴＲＡＬＳＰＨＩＮＧＯＭＹＥＬＩＮＡＳＥＹｅＬｉｈｕａＡＴｈｅｓｉｓ如ｂｍｉｔｔｅｄ化ＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙ＊ｕ虹ＩａｒｔｉａｌＦｕｌ仙ｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｉｒｅｍｅｎｔｓｑＦｏｒｔｈｅＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅｏｆＡｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅｇｇＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐ

4、ｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＦａｎＪｉｃｈａｏｇＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＥＷｏｍｏｌｏｐｇｙＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＮａｎ山２１００９５，ＣｈｉｎａＪｉｍｅ２０１５ｊｇ，，原创性声明本人郑重声明：，是本人在导师的指导下所呈交的学位论文，独立进行研巧工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的

5、个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者（需亲笔｝签名：年月日ｗ／＾ｉ叫；ｊｒ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密Ｘｊ

6、／（请在［＾１？上方框内巧寸）学位论文作者（需亲笔）签名：而ｗ／ｒ年ｔ月＾日导师（需亲笔）签名劝护年《月＾曰目表目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ一第胃综述１１神经醜胺庚的研究进展１１．１酸性神经醜胺庚（Ａｃｉｄｃｅｒａｍｉｄａｓｅ，ＡＣ）１１．２中性神经酥胺酶（Ｎｅｕｔｒａｌｃｅｒａｍｉｄａｓｅ，ＮＣ）３１．３骄胺酶（ＡｌｋａｌｉｎｅｃｅｒａｍｉｄａｓｅＡＣＥＲ）５城性神经，２销磯脂酶的研巧进展７２．１酸性

7、銷磯脂酶（Ａｃｉｄｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ，ａＳＭａｓｅ）７２．２分泌型銷稱月旨酶（Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ，ｓＳＭａｓｅ）８２．３中性销磯脂酶（Ｎｅｕｔｒａｌｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ，ｎＳＭａｓｅ）９２．４碱性销磯脂酶（Ａｌｋａｌｉｎｅｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ，ａｌｋＳＭａｓｅ）１０３研究目的和意义１１第二章二化換碱性神经醜胺酶和中性銷磯脂酶基因的克隆及表达１３１实验Ｍ料１４１．

8、１供试娜１４１．２细胞系和真核表达系统１４１．３试剂１４１．４仪器设备１４１．５工具酶１４１．６试剂配制１５２实验方法１５２．１总ＲＮＡ的提取１５２．２ＰＣＲ引物设计１６２—．３ｃＤＮＡ１６Ｈ２．４ＰＣＲ増１７扩２．５ＰＣＲ产物纯化１７２乂ＰＣＲ产物平末端；ｔｏＡ１７２．７感受态细胞制备（ＣａＣｋ法）１８２．８连接转化１８