中性粒细胞碱性磷酸酶

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1、中性粒细胞碱性磷酸酶（N-ALPNAP）碱性磷酸酶包括一组在PH中性以上能够从很多醇和酚的单磷酸酯释放出碱的同功酶。一．正常分布：人体血液与造血细胞的碱性磷酸酶活性，主要存在于中性粒细胞系统的成熟阶段中，其他成分如嗜酸、嗜碱、淋巴、单核以及巨核细胞，血小板，浆细胞等均为阴性反应，网状内皮细胞和巨嗜细胞的反应为强阳性。二．生理变化：1．年龄变化：新生儿ALP极高，随后下降，成人较儿童期减低，老年期（>6）最低。2．性别差异：无差别，但也有报道女>男。3．季节变化：夏季为高。4．应激状态下的变化：紧张、恐惧、休克、激烈运动等。5．妊娠期的变化：妊娠2~3个月时。NAP轻度高。以后逐月

2、趋于显著。6．与激素的关系：肾上腺皮质激素，雌激素和ACTH都有使NAP活性升高，有人认为ACTH的作用是通过肾上腺皮质而发生的。三．临床意义：1．重度增高：类白血病反应：NAP活性极度增高与CML鉴别。感染：细菌感染的NAP改变比较明显，其中，NAP活性高度增高者见于各种急性化脓性感染（如败血症、大叶性肺炎、化脓性脑膜炎等）。2．中度增高：感染：见于支气管肺炎、肾盂肾炎。贫血：AA。非AL性骨髓增生性疾患：PV、骨髓纤维化、CML合并骨髓硬化症、持发性ITP、AL：ALL。恶性淋巴瘤：何杰金氏淋巴瘤。3．轻度增高：感染：上呼吸道感染、肺结核等。网状细胞增高，遗传性低NAP症。A

3、L：MM、神经母细胞瘤。贫血：溶血性贫血。4．降低：贫血：镰形细胞贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿。AL：CML显著减低感染：病毒性感染、特别是病毒性肺炎。5．正常或无规律：急粒的NAP活性可减低也可正常。并发感染时可有中度升高。当治疗后充分缓解时，有些NAP活性可恢复正常。单核细胞改变缺乏的规律性，绿色瘤和M6与急粒相似。网状细胞肉瘤多数病例增高，少数在正常范围内。淋巴肉瘤可增高，可正常。MDS可增高、正常和减低。主要鉴别：1．CML—类白2．PNH—AA3．ALL—ANLL4．PV—反应性PV5．细菌升高—病毒（特别是肺炎）四．染色方法：碱性磷酸酶是一种能分解磷酸酯的水解酶，方法

4、不同，原理不同。国际标准化委员会提出。推荐的方法应该是快速，简便，容易重复，并有很宽的技术范围。方法：（1）钙—钴法（2）未取代萘酚法：底物а—磷酸萘酚钠。（3）取代萘酚法：国际标准委员会推荐两种方法:A．1963年Kaplow等：萘AS-BI磷酸盐B．1963年Tomonaga等：萘AS-MX磷酸盐国际标准化委员会认为а—萘磷酸盐产生的反应产物。生色团不好，并且是水溶性的，因此使用这种基质的方法是不满意的，只有考虑应用那些萘磷酸的代用品。适当耦联物的选择是基于从技术观点看耦联物的特性，及它们是否容易获得，这两个方面。萘AS-BI磷酸盐，结果快。萘AS-MX磷酸盐，因为它耗费时间

5、，除日本外其它国家很少了解，但它对白细胞中酶染色的质量是比较好的。其它细胞化学反应的技术因素，如固定pH范围，温浴时间，温浴介质的缓冲作用等也应予以考虑。国外大都应用萘酚AS-BI磷酸。上海儿研所对三种白细胞碱性磷酸酶染色方法的评价，认为（1）钙钴法平均阳性指数最低仅2.12。虽有人主张延长孵育时间以提高阳性率和阳性指数，但由于孵育时间长，易使阳性产物扩散；且钙—钴法的基质液的配制较麻烦，影响其结果的因素很多。（2）未取代萘酚法虽然反应时间缩短，阳性指数正常值相对较为稳定，但基质液不能长期保存，每次需临时配制孵育液。（3）取代萘酚法较其它方法有以下特点，酶活性显示较充分，正常值6

6、8%以上可以显示LAP活性，阳性指数均值较其它方法高，反应酶的钝化与丢失较少，阳性产物色泽鲜明，溶解度低，不扩散，因而定位精确，有利于评定ALP活性强度的分级，例三者平均值。表一NAP三种试验方法比较组别钙—钴法未取代萘酚法取代萘酚法阳性率%阳性指数阳性率%阳性指数阳性率%阳性指数范围X（平均）范围X（平均）+SD范围X（平均）范围X（平均）±SD范围X（平均）范围X（平均）±SD高阳性指数组（N=24）35-816866-254210±13.540-767045.8-154101±1785-10093347-540450.3±5正常阳性指数组（N=60）20-393441-82

7、62±1817-40.52618-69.849.5±2068-9984.1164-380240.2±56.2低阳性指数组（N=22）10-402912-8457±206-55406-7040±2840-806124-396186±38染色方法介绍：一钙-钴法：（一）原理：磷酸酶能水解各种磷酸有机盐，并释放出磷酸，组化方法是利用被释放出来磷酸与Ca2+结合，成为磷酸钙而沉淀下来，再与硝酸钴与硫化铵作用。生成黑色的硫化钴。（二）试剂1．孵育液：3%β-甘油磷酸钠10ml2%巴比妥钠3