七鳃鳗phb2增强细胞氧化应激耐受的作用及机制初探

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2、．．：化＼．．作者姓名；王颖‘這、．、、拓，．．Ｖ，学科、专业；海洋生物学巧：销屏賴ｉｌ麵．－．研究方向：海洋生物功能蛋白．，涯—一卿麵Ｉ’．、；奸碟蹲导师姓名李铁松副教授八峨、為補捧诗雌．站＼’，’＼、＾：＞．２０１５：：．致豁、胖．：１；＼．年３月城带诫巧；聲弊於，护、．１；．燃漢，４每．、八渗纖議據難：麻娘鷄纖贈疗：寧灘、＇’、＇‘＂、庐－－．．ｖ５品．．ｋ■－叶＇．’．八＇．．苗ｒ巧、、碱巧贯巧学位论文独创性声明本人承诺：所呈交

3、的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做Ｉ明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：斗Ｍｌ学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解迂宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部口或机构送交复印件或磁盘－允许论文被查阅和借阅。本文授权化宁师范大学，可１＾＞（将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

4、并进行检索，可（＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质一论文的内容相致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：指导教师签＞名＿签名日期：口少年＾月日／辽宁师范大学硕士学位论文摘要七鳃鳗是我国东北部特有的鱼形动物，是连接无脊椎与脊椎动物的桥梁。PHB蛋白广泛分布于多种生物细胞中，主要以异源二聚体的形式锚定在线粒体内膜，动态维持线粒体结构及功能的稳定。当线粒体氧化呼吸链功能异常，氧自由基过量积累，极易形成氧化应激，它是

5、引起神经退行性疾病、肿瘤及诸多慢性病症的重要原因。基于PHB动态调节线粒体功能稳定与细胞氧化应激反应紧密相关，PHB正逐步成为研究多种细胞增强氧化应激耐受作用的热点蛋白。然而PHB家族之一的PHB2与处于氧化应激环境中七鳃鳗适应性的关系，目前尚无人研究。本论文以七鳃鳗PHB2蛋白在组织、细胞氧化应激中的作用和机制为着眼点开展研究，有助于七鳃鳗PHB2蛋白功能的揭示，为阐述人PHB2在氧化应激中作用机制的演化提供了线索。本研究利用免疫荧光实验检测了七鳃鳗Lm-PHB2蛋白在鳃和肾细胞中的定位，利用阿

6、霉素注射和H2O2刺激的方法分别构建七鳃鳗氧化应激动物模型和人正常细胞的氧化应激模型，通过QPCR和Westernblot的方法检测了Lm-PHB2在氧化应激刺激前后各组织中的分布和表达，通过外加蛋白孵育细胞和构建真核表达载体及细胞瞬时转染实验，利用MTT法分析了重组蛋白rLm-PHB2和真核表达蛋白Lm-PHB2在人张氏肝细胞和肺上皮细胞氧化应激中的作用，利用激光共聚焦显微镜观察了氧化应激条件下Lm-PHB2在人张氏肝细胞中的定位迁移，利用QPCR法分析了氧化应激条件下Lm-PHB2与VDAC3

7、和TP53之间的表达关系。结果表明，Lm-PHB2主要定位在线粒体和细胞核；Lm-PHB2在七鳃鳗的主要组织中均有表达，且它的表达与组织细胞的氧化应激密切相关；rLm-PHB2能够增加人张氏肝细胞和肺上皮细胞的氧化应激耐受性；Lm-PHB2增强张氏肝细胞氧化应激耐受性与其从细胞核向线粒体的定位迁移紧密相关；氧化应激条件下Lm-PHB2与VDAC3和TP53在不同组织中表现出不同的表达关系。综上，七鳃鳗Lm-PHB2能够增强细胞的氧化应激耐受性，在人张氏肝细胞中很可能是通过蛋白的定位迁移实现的，而在

8、七鳃鳗的组织细胞中可能是利用与VDAC3和TP53的相互作用，通过多条信号通路增强细胞的氧化应激耐受性。关键词：七鳃鳗；PHB2；氧化应激；耐受性增强；机制初探-I-七鳃鳗PHB2增强细胞氧化应激耐受的作用及机制初探LampreysPHB2enhancecellularoxidativestresstoleranceandmechanismexplorationAbstractLampreysareuniquefishanimalsinthenortheastofChina,it'