非典型性趋化因子ccrl2在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究

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1、《訓１ＩＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩ博：ｔ学錢文Ｊ｜■论文题目非典型性趋化因子ＣＣＲＬ２在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究研究生姓名杨飞肖导教ＩＩ巾姓Ｓ朱力专业名称医学细胞生物学研究方向动脉粥样硬化机制ｓＨ论文提交日期２０１５年９月画Ｉ苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，

2、也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研巧作出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：抵％日期：ｉ苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中也、中国科学技术信息研巧所（含万方数据电子出版狂）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位

3、论文的复印件和电子文档，允许论文被査阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇学位论编文，可Ｗ将学位论文的全部或部分容有内编入关巧进。据库行检索涉密论文〇本学位论文属密？在年月解后适用本规定＿＾非涉密论文回￣＾－＞＾ｉＳ文者签名：據日：论作期导名！！师签日期一非典型性趋化因子受体CCRL2在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究中文摘要中文摘要动脉粥样硬化（Atherosclerosis，以下简称AS）是一种多因素诱导的慢性炎症性血管疾病，伴随着脂质在血管壁下的

4、沉积，形成成分复杂、不断扩大的易损斑块，一旦斑块破裂，形成的动脉血栓会造成管腔狭窄或堵塞，影响重要组织器官的供血，导致急性冠脉综合征、心肌梗死和脑梗死等恶性临床事件。在招募促AS的炎症细胞过程中，涉及一系列包括白细胞的滚动、粘附、浸润以及向内膜下渗透等过程，这些大都是由趋化因子及其受体所介导，因此趋化因子及其受体在AS研究中一直广受关注，通过基因敲除小鼠和拮抗剂等研究趋化因子及其受体系统在AS中的作用，能够深入研究其致AS作用机制，目前已有专门针对趋化因子受体作为靶点而开发的治疗药物上市，所以这一领域的研究必将对AS干预治疗

5、起到积极作用。研究表明非典型性趋化因子CCRL2（即C-C类趋化因子受体样蛋白2，chemokineCC-motifreceptor-like2）的表达非常广泛，包括小鼠内皮细胞、巨噬细胞、树突状细胞等，并参与许多病理过程。其配体为chemerin，而chemerin还可与的受体CMKLR1结合。尤其是已有报道chemerin和CMKLR1表达在人冠状动脉及小鼠主动脉AS斑块中，然而CCRL2是否促进AS的发展还不清楚。目的我们利用ApoE敲除小鼠建立AS模型，通过CCRL2、ApoE双基因敲除小鼠证明CCRL2敲除对于AS

6、发生发展的影响，阐明CCRL2及其配体chemerin参与AS发生发展过程中的作用机制。方法1.利用ApoE-/-小鼠喂食高脂饲料0、4、8、12周模拟AS发病过程，而后提取主动脉的mRNA和蛋白，通过Quantitativerealtime-PCR、Westernblot、ELISA技术检测AS发生过程中小鼠主动脉内CCRL2及chemerin的表达变化，以及血清中chemerin含量变化。2.对照组CCRL2+/+ApoE-/-和实验组CCRL2-/-ApoE-/-小鼠喂食高脂饲料4、16、24周模拟AS过程，利用苏丹红

7、IV染色，对比两组小鼠整体主动脉以及主动脉弓、I中文摘要非典型性趋化因子受体CCRL2在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究主动脉下行支斑块大小，再利用冰冻切片结合油红O染色技术，比较两组小鼠主动脉根部斑块大小。在此过程中，监测两组小鼠12周后的体重及血清中血脂含量在喂食高脂饲料前后的变化。3.对照组CCRL2+/+ApoE-/-和实验组CCRL2-/-ApoE-/-小鼠喂食高脂饲料12周模拟AS过程，使用各类炎症细胞特异性标志（marker）包括巨噬细胞（MOMA-2）、树突状细胞（CD11c）、T淋巴细胞（CD3）、平滑肌细

8、胞（αSMA）等，利用主动脉根部冰冻切片结合免疫荧光方法，检测CCRL2敲除是否影响斑块内各类炎症细胞浸润。利用冰冻切片结合Masson染色技术，检测斑块内胶原含量变化，以观察CCRL2对于斑块稳定性的影响。利用RT-qPCR方法检测小鼠主动脉内M1、M2型巨噬细胞释放的细胞因子（M1型：