负载姜黄素的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研究

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1、中图分类号*R*9»R36»R39SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文负载姜黄索的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研究院（系)、所临床医学院.研究生姓名张___________燕学科、专处肿痛学导师姓名范娟教授二〇—五年五月1目录负载姜黄素的纳米胶束对宫颈癌的抑制作用研1究……………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………31.2英文摘要………………………………………………………71.3前言……………………………………………………………131.4材料

2、与方法……………………………………………………161.5结果……………………………………………………………311.6讨论……………………………………………………………461.7结论……………………………………………………………501.8参考文献………………………………………………………511.9英汉缩略词对照表……………………………………………552致谢……………………………………………………………56姜黄素对宫颈癌放射增敏研究进展（综3述）…………………………………………………………………57-2-负载姜黄素的纳米胶束

3、对宫颈癌的抑制作用研究摘要目的：制备负载姜黄素的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸纳米胶束PEG-PLA/CUR）。通过观察mPEG-PLA/CUR纳米胶束的载药量、包封率、粒径及体外药物释放情况来了解其理化性质；进一步考察（mEG-PLA/CUR体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用、细胞摄取及体内抗肿瘤作用，并初步探讨其抗宫颈癌的可能机制。方法：该研究分两m个阶段完成。第一阶段（体外阶段）：采用固P体分散法制备出三组不同姜黄素浓度的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸载姜黄素纳米胶束mPEG-PLA/CUR）。采用高效液相色谱仪测定三组

4、不同姜黄素浓度的EG-PLA/CUR纳米胶束的包封率和载药量，选定其中具有较高包封率和（载药量的一组浓度为后续实验所用纳米药物。原子力显微镜下观察选定浓m度的单甲氧基聚乙二醇-聚P乳酸载姜黄素纳米胶束的形貌，激光粒径分析测定mPEG-PLA/CUR纳米胶束的粒径。选用选定浓度的mPEG-PLA/CUR纳米胶束进行体外药物释放实验，通过高效液相色谱仪测定其体外药物释仪放。通过MTT法测定生理盐水、空白载体mPEG-PLA聚合物、游离姜黄素、mPEG-PLA/CUR纳米胶束对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。通过倒-3-置荧光

5、显微镜观察宫颈癌Hela细胞对空白载体mPEG-PLA聚合物、mPEG-PLA/CUR纳米胶束、游离姜黄素的摄取。第二阶段（体内阶段）：构建动物模型，首先将36只裸鼠用耳钉编号，皮下接种人宫颈癌细胞成瘤后的裸鼠随机分为4组（各组分别为9只），向每组抽取其中3只用做免疫组化，用剩下的6只裸鼠来观察生存期，具体分组情况为：(1)：生理盐水组(阴性组)；(2)：空白载体mPEG-PLA聚合物组(载体组)；(3)：游离姜黄素组(25mg/Kg)(游离组)；(4)：mPEG-PLA/CUR纳米胶束组(以姜黄素剂量计算25mg/Kg

6、)(复合组)。待肿瘤长到约0.1cm3时通过裸鼠尾静脉分别注射四组药物（按照0.005ml/10g），每隔1天注射一次，共注射两周。每隔2天使用游标卡尺测量一次瘤块的长、短径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线图；同时观察裸鼠的生长状态、一般情况及生存期，在给完2周药后每个组分别处死3只裸鼠，剥离瘤块，测量瘤重，绘制瘤重曲线图，再通过免疫组化法测定其Ki-67、MVD(CD31)、VEGF初步探讨mPEG-PLA/CUR纳米胶束抗宫颈癌的可能机制。结果：1、成功制备出三组不同浓度的mPEG-PLA/CUR纳米胶束。2、分别测

7、定三组mPEG-PLA/CUR纳米胶束，载药量分别为3.22±0.51%、7.22±0.42%、8.06±1.5%，包封率分别为80.58±0.13%、90.42±0.05%、80.6±0.15%，证实mPEG-PLA（92mg）载姜黄素（8mg）纳米胶束具有良好的载药量与包封率。3、mPEG-PLA（92mg）载姜黄素（8mg）纳米胶束的平均粒径为119.6nm,粒径分散均匀，呈单峰分布。4、游离姜黄素中的姜黄素在12小时内大约66%从透析袋中释放出来，在24小时大约80%姜黄素从透析袋中释放出来；然而mPEG-PLA

8、/CUR纳米胶束中的姜黄素在第14天的时候仅有59%从纳-4-米胶束中释放出来，证实mPEG-PLA/CUR纳米胶束具有良好的缓释特性。5、通过倒置荧光显微镜观察经过空白载体mPEG-PLA处理后的Hela细胞始终未见绿色荧光，用游离姜黄素处理后的Hela细胞在2小时后观察到微弱绿色荧光、4小时后观察到稍强绿色荧光，