苯并[a]芘对栉孔扇贝生殖毒性机制的研究

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1、相料义＊變＇ＭＶｏｎ．ＡＮＩＩＲＳＩ（）！ｎＵＮＡ硕ｄｂ学位论文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮｉ１论文题目：苯并Ｍ巧对巧孔扇贝生殖毒性机制的研究ＳｔｕｄｏｎＭｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒＲｅｒｏｄｕｃｔｉｖｅＴｏｘｉｃｉｔｙｐｙ：ｏｆＳｃａｌｌｏＣｈ英文题目Ｂｅｎｚｏｇｒｅｎｅｏｎｌａｍｓａｒｒｅｒｉ［］ｐｙｐｙｆ作者：邓旭化指导教师：潘鲁青教授学位类别；全日制学术学位专业名称：水生生物学研究方向：水生动物

2、生理学？’—．：麻？厂‘一叫—；：少接巧巧敬冰谨＞（１＾此论文献给研究海洋软体动物生殖毒性的科研工作者！苯并［ａ］巧对巧孔扇贝生殖毒性化制的研究学位论文答辩日期：气等专三指导教师签字：：答辩委员会成员签字抑爭ｌｂＩ，独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果，，。据我所知除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同

3、工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：兴地池签字日期：年ｉ：月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用＇影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会

4、公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：个导师签字：■年ｒ签字日期；年月三怕签字日期；＞１５月苯并［ａ］巧对巧孔扇贝生殖毒性机制的研究苯并［ａ］巧对巧孔扇贝生殖毒性机制的研究摘要ｌｃｃｌｉＨ本文参照目前我国近海多环芳炫（ＰｏｙｙｉｃＡｒｏｍａｔｃｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ，ＰＡＨｓ）一ｅｎｚｏｅｎｅａ代表物质之苯并ａｒＢＰ）的真实括染程度，近海养殖重［ａ］巧（ｂ，［］ｐｙ要经济贝类巧孔扇贝（Ｃ／，ａＰ胁迫下７始为研巧对象筛选了Ｂ

5、性腺差异表达基因，测定了巧孔扇贝性腺及血淋己性激素含量，探究了多浓度多时间点ＢａＰａＰ、胁迫下生殖毒性响应关键基因的表达模式，并研究了Ｂ胁迫对巧孔扇贝卵巢精巢ＤＮＡ单链断裂Ａ含量影响，最后Ｌ组织显微切片、蛋白质叛基含量、ＭＤ：Ａ的方式验证Ｂ沁对巧孔扇贝性腺造成的生殖毒性。得到的具体实验结果如下：１．巧孔扇贝在ＢａＰ胁迫下性腺差异表达基因的筛选与分析本实验运用数字基因表达谱技术（Ｄｉｇｉｔａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＤＧＥ）根据巧孔扇贝性腺组织对照组和化卽ｇ／ＬＢａＰ

6、染毒组ｌＯｄ的ＤＧＥ数据对比筛选差异表达基因１２４８５０５５和１４４５４１２７ｃｌｅａｎ。其中精巢组织对照组与染毒组分别获取条ｒｅａｄｓ，将ｃｌｅａｎｒｅａｄｓ与本实验室己提交的巧孔扇贝转录组（ＳＲＰ０１８０４４）ｕｎｉｇｅｎｅ进行拼接比对，比对率分别为７４．２４％和７７．２７％过数据分析，共筛得差异；通表达基因１０５１条，其中上调基因２２３条，下调基因８２８条。经ＧＯ功能聚类分析显示，差异基因主要涉及芳香族化合物代谢、ＡＴＰ代谢、免疫防御、细胞调亡和精子发育、精子分化等功能；ＫＥ

7、ＧＧ通路分析表明富集显著的代谢通路包括Ｓ－幾酸循环通路、氧化憐酸化通路、ＮＯＤｌｉｋｅ受体信号通路、类固醇合成通路等。运用实时巧光定量ＰＣＲ（－ＱＲＴＰＣＲ）技术，选取９条差异表达关键基因（ＨＳＰ９０、ＣＹＰ３Ａ、ＨＧＤ、ＣＤＫ２、ＩＡＰ、ＴＳＳＫ２、ＰＤＥ５和１７ＨＳＤ、Ｅ２ＳＵＬＴ）验证了ＤＧＥ结果的可靠性。卵巢组织对照组和染毒组ＤＧＥ分别获取１３，６６６，８８２和］４，２７６，５７９条ｃｌｅａｎｒｅａｄｓ７４．４，比对率分别为．５５％和７８６％，共筛得差异表达

8、基因１２４条，其中上调基因４２条，下调基因８２条。与苯并巧生殖毒性相关的差异基因主要聚类于解毒代谢、细胞外基质与细胞间相互作用的损伤效应、内分泌干扰效应和组织损伤等效应。由Ｗ上看出，巧孔扇贝在ＢａＰ胁迫下精巢的解毒代谢、能量代谢和免疫防御等功能发生了变化，引起了细胞调ｔ等损伤效应，并干扰了类固醇（性激素前体物质）的合成和精子的形成过程：卵巢的解毒代谢、细胞骨架及性Ｉ苯并ａ巧对巧孔扇贝生