苯并[α]芘对栉孔扇贝生殖毒性机制的研究

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1、万方数据苯并【Q】芘对栉孑L扇贝生殖毒性机制的研究万方数据谨以此论文献给研究海洋软体动物生殖毒性的科研工作者!万方数据独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：砷趟驰’签字日期：如，f年j月)P日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允

2、许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：砷渺导师签签字日期：x侈年j月螬日签字日期≯f湃厂月叼代万方数据苯并【a】芘对栉孔扇贝生殖毒性机制的研究苯并[仅]芘对栉孑L扇贝生殖毒性机制的研究摘要本文参照目前我国近海多环芳烃(PolycyclicAromaticHydrocarbons，PAHs)代表物质之一苯并[Q]芘(benzo[a

3、]pyrene，BaP)的真实污染程度，以近海养殖重要经济贝类栉孔扇贝(Chlamysfarreri)为研究对象，筛选了BaP胁迫下性腺差异表达基因，测定了栉孔扇贝性腺及血淋巴性激素含量，探究了多浓度多时间点BaP胁迫下生殖毒性响应关键基因的表达模式，并研究了BaP胁迫对栉孑L扇贝卵巢、精巢DNA单链断裂、蛋白质羰基含量、MDA含量影响，最后以组织显微切片的方式验证BaP对栉孔扇贝性腺造成的生殖毒性。得到的具体实验结果如下：1．栉孔扇贝在BaP胁迫下性腺差异表达基因的筛选与分析本实验运用数字基因表达谱技术(Digitalgeneexpression，DGE)根据栉孔扇贝性腺组织对照组和O．5

4、“g／LBaP染毒组10d的DGE数据对比筛选差异表达基因。其中精巢组织对照组与染毒组分别获取12485055和14454127条cleanreads，将cleanreads与本实验室己提交的栉孔扇贝转录组(SRP018044)unigene进行拼接比对，比对率分别为74．24％和77．27％；通过数据分析，共筛得差异表达基因1051条，其中上调基因223条，下调基因828条。经GO功能聚类分析显示，差异基因主要涉及芳香族化合物代谢、ATP代谢、免疫防御、细胞凋亡和精子发育、精子分化等功能；KEGG通路分析表明富集显著的代谢通路包括三羧酸循环通路、氧化磷酸化通路、NOD．1ike受体信号通路

5、、类固醇合成通路等。运用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术，选取9条差异表达关键基因(HSP90、CYP3A、HGD、CDK2、lAP、TSSK2、PDE5和17HSD、E2SUIJ)验证了DGE结果的可靠性。卵巢组织对照组和染毒组DGE分别获取13，666，882和14，276，579条cleanreads，比对率分别为74．55％和78．46％，共筛得差异表达基因124条，其中上调基因42条，下调基因82条。与苯并芘生殖毒性相关的差异基因主要聚类于解毒代谢、细胞外基质与细胞间相互作用的损伤效应、内分泌干扰效应和组织损伤等效应。由以上看出，栉孔扇贝在BaP胁迫下精巢的解毒代谢、能量代

6、谢和免疫防御等功能发生了变化，引起了细胞凋亡等损伤效应，并干扰了类固醇(性激素前体物质)的合成和精子的形成过程：卵巢的解毒代谢、细胞骨架及性I万方数据苯并【Q】芘对栉孔扇贝生殖毒性机制的研究腺发育相关基因的表达水平发生了变化，引起了细胞质基质疏松，造成了损伤效应，并干扰卵巢发育等过程。2．栉孔扇贝在BaP胁迫下生殖内分泌干扰效应的研究本实验将栉孔扇贝暴露于染毒浓度为0、0．1、0．5、2。5rtgm的BaP中，分别于O、3d、10d、21d取样，采用酶联免疫试剂盒测定栉孔扇贝精巢卵巢及血淋巴中性激素的含量，采用实时定量PCR技术测定了DGE测序筛得的差异表达的细胞粘连、凋亡相关基因(早．IT

7、GA9、COL6A3，艿．5IAP、CDK2)，性激素合成和性腺发育相关基因(早．CYPl7、3p．HSD、17p．HSD、ER、VTG，8一CYPl7、3p—HSD、17B．HSD、TSSK2、PDE)，研究了BaP胁迫对栉孔扇贝性激素含量的影响，探究了多浓度多时间点BaP胁迫下生殖毒性响应关键基因的表达模式。本研究中BaP胁迫对栉孔扇贝性腺组织和血淋巴三种激素含量均产生了显著影响。在卵巢组织中，BaP显著