芳香化酶超表达引起雄鼠不育分子机理研究

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1、分类号：单位代码密级：公开发行，不设密级学号：博士学位论文芳香化酶超表达引起雄鼠不育分子机理研究研究生：于万鹏指导教师：李向东教授申请学位门类类别：理学博士专业名称：生理学研究方向：分子内分泌所在学院：生物学院年月ChinaAgriculturalUniversityPh.DDissertationMolecularmechanismsofmaleinfertilityintransgenicmalemiceoverexpressingaromatase(Cypl9al)Ph.DCandidate:YuWanpengSuperv

2、isor:Prof.LiXiangdongSpecialty:PhysiologyJune,2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：明时间：年月曰关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有

3、权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：年月曰摘要男性不育的定义是，育龄夫妇同居一年，未釆取任何避孕措施，因男方原因造成女方不孕称为男性不育。男性不育发病率呈增高趋势，已占整个不育夫妇比例的。大量的临床和研究表明，雌雄激素比例失衡是男性不育的重要病因之一，相当数量的不育男性表现出体内雄激素尺平下降，雌激素水平上升，雌雄激素比例失调。虽然

4、对于男性不育的研究取得一定成绩，但缺乏与激素相关引发男性不育且能稳定反映病理过程的实验动物模型，因此对于其机理的研究没有突破性进展。本文以为背景的芳香化酶超表达转基因雄鼠为模型，研究芳香化酶超表达引起雌雄激素比例失衡进而导致雄性不育的分子机制。本研究发现，雄鼠血清中雌雄激素（雌二醇睾酮）水平失调，睾丸萎缩，雄性不育；通过细胞核增殖抗原（的免疫组织化学分析和整个睾丸细胞（计数证实雄鼠月到月龄睾丸大量增殖，月龄时睾丸间质中巨噬细胞大量激活而数目急剧下降，出现睾丸巨噬细胞吞噬睾丸的现象。由于的作用是分泌睾酮，维持生精，因此巨噬细胞吞噬

5、是引起雄性不育的重要原因。鼠和雌激素受体敲除鼠（杂交敲除雄鼠雌激素受体，细胞计数发现雄鼠睾丸数目恢复到和野生型（相同水平，同时发现睾丸巨噬细胞激活相关基因高表达；同时对雄鼠施用芳香化酶抑制剂（和雌激素受体抑制剂（睾丸表型与—致。以上结果表明雌激素通过其受体引起增殖同时激活巨噬细胞，引起巨噬细胞吞噬引发不育。进一步研究发现，雌激素通过其受体引起胞内浓度上升，进而激活了细胞膜翻转酶（引起处于增殖状态而并不凋亡的释放“吃我”信号磷脂醜丝氨酸（同时超表达生长停滞特异性基因；雌激素通过其受体引起巨噬细胞表面超表达受体酪氨酸激酶亚家族（包括

6、、和中的超表达，能够结合表面的，巨噬细胞通过的非凋亡依赖方式吞噬了正在增殖的。同时，体外分离睾丸和巨噬细胞共孵育，活细胞成像系统下也实时观测到了这种雌激素依赖的吞噬现象。另外，免疫荧光检测非梗阻性无精子症男性（睾丸穿剌切片分子标记物（、和发现非梗阻性不育男性和不育雄鼠模型分子表达变化一致。此外，不育男性和正常男性血清学分析表明，不育男性体内雌激素水平上升，雄激素水平下降，雌雄激素比例失调，同时水平显著上升，这也印证了小鼠实验的结论，说明雄性小鼠不育模型和男性不育具有相关性。综上所述，雌激素通过受体信号引起睾丸增殖，同时通过激活了

7、睾丸巨噬细胞，引起两种细胞基因变化最终导致巨噬细胞吞睡引发不育。另外，我们提出将基因作为临床治疗男性不育的潜在研究祀标。关键词：男性不育，芳香化酶，雌激素，吞噬作用AbstractMaleinfertilityreferstoamale'sinabilitytocausepregnancyinafertilityfemaleafteroneyearofunprotectedintercourse.Maleinfertilityaccountsforalmost40%-50%infertilitycases.Anumerouscl

8、inicalstudieshavedemonstratedthatthebalancebetweentestosteroneandestrogeniscriticalforthedevelopmentofmaleinfertility.Asubsetofinfe