肠球菌多重pcr方法的建立及不同来源肠球菌种属分布和耐药特点初探

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1、分类号：密级：单位代码：10092学号：20121235HEBEINORTHUNIVERSITY硕士学位论文肠球菌多重PCR方法的建立及不同来源肠球菌种属分布和耐药特点初探单位：河北北方学院专业：内科学研究生姓名：刘佳导师姓名及职称：梁建琴教授研究起止日期：2013.3-2014.10提交日期：2015.3分类号：密级：单位代码：10092学号：20121235肠球菌多重PCR方法的建立及不同来源肠球菌种属分布和耐药特点初探单位：河北北方学院内科学专业：刘佳研究生姓名：梁建琴教授导师姓名及职称：2013.3-2014.10研究起止日期：提交日期：2015.3河北北方学院学位论文使用授权及知识

2、产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。导师签名：研究生签名：2015年06月01日河北北方学院研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名：研究生签名：2015年06月01日目录目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………

3、……………………4英文缩写…………………………………………………………………7研究论文肠球菌多重PCR方法的建立及不同来源肠球菌种属分布和耐药特点初探前言..………………………………………………………………8材料与方法…………………………………………………………11结果………………………………………………………………16附图………………………………………………………………21附表………………………………………………………………24讨论………………………………………………………………31结论………………………………………………………………36参考文献…………………………………………………………

4、…37综述链阳菌素的作用机制及细菌耐药机制……………42致谢………………………………………………………………53个人简历………………………………………………………………54Ⅰ中文摘要肠球菌多重PCR方法的建立及不同来源肠球菌种属分布和耐药特点初探摘要肠球菌为重要的人兽共患条件致病菌，可引起人和动物多部位的感染。肠球菌也是我国院内感染的重要病原菌之一，近年来，多重耐药肠球菌、万古霉素耐药肠球菌（vancomycin-resistantEnterococci，VRE）的出现，对临床肠球菌的感染控制提出了挑战。肠球菌属包括近40个种，人类及哺乳动物消化道均普遍携带。不同种属肠球菌的分布特征及药物敏

5、感性有很大差异，如鹑鸡肠球菌、钻黄肠球菌因携带天然万古霉素耐药基因vanC表现出对万古霉素固有耐药。耐药基因水平转移是肠球菌耐药性获得的主要分子机制之一。不仅仅是人类机体，养殖动物、环境都可能作为肠球菌耐药基因的储存库。因此了解不同来源肠球菌的种属分布及其药物敏感性特征将有助于研究耐药肠球菌的流行规律和传播途径，帮助临床更有效的预防和控制耐药肠球菌的感染。本课题对来自社区人群及养殖场动物（鸡、猪）的粪便样本进行肠球菌的分离培养，通过建立的肠球菌种属鉴定的多重PCR方法对分离菌株进行种属鉴定；采用纸片扩散（diskdiffusionmethod,K-B)法、琼脂稀释法对不同来源肠球菌进行抗菌药

6、物的敏感性检测；应用建立的肠球菌属、常见肠球菌种及万古霉素耐药基因型检测的多重PCR方法对VRE疑似菌株进行耐药基因型检测，以期初步阐述我国不同来源肠球菌的种属分布及其药物敏感性特征。选择包括肠球菌属及6个肠球菌种（粪肠球菌、屎肠球菌、鹑鸡肠球菌、钻黄肠球菌、坚韧肠球菌、鸟肠球菌）在内的特异性扩增引物，以16SrDNA特异性扩增引物作为内参，建立鉴定肠球菌属及6个肠球菌种的8重PCR方法；选择肠球菌属、粪肠球菌、屎肠球菌、4个常见万古霉素耐药基因型（vanA、vanB、vanC1、vanC2/C3）特异性1中文摘要扩增引物，以1对16SrDNA引物作为内参建立用于肠球菌属、常见肠球菌种及万古

7、霉素耐药基因型检测的8重PCR方法。经过扩增产物多对特异性引物反复试验，两套8重PCR体系最终各选用最佳的8对特异性引物，准确快速检测肠球菌种属及万古霉素耐药基因型。对220份社区人群及养殖场动物（鸡、猪）的粪便样本中肠球菌进行分离培养、种属鉴定及药物敏感性分析显示：肠球菌总分离率为70.91%（156/220），其中猪源样本肠球菌分离率最高(86.00%)，人源样本肠球菌分离率最低（62.63%），且人源与