白及的假鳞茎诱导、遗传资源鉴定与评价的研究

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1、＇７索取号：Ｒ９１／６．５３１吿巧：ｉＵｈ南东巧苑乂聲硕±学位论文．．甜脯巧宜旦白及的假鱗茎诱导、遗传资源鉴定与评价的研究研究生：孙宇龙指导教师：下小余教巧培养单位；生命稱学学院一级学科：生物学二级学科；植物学完成巧间：２０１５年４月１５曰答辩时间：２０１５年５月２３日？＇？＞，‘学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研巧成果。本论文中除引文外，所有试验、数据和有关材

2、料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构己经发表或撰写过的研巧成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。＇、：学位论文作者签名：别《衫日期必狀ｉｒｊＪ学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可Ｗ采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可レッ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查

3、阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文：么，密级為保密期限为。年学位论文作者签名指导教师签名：日期：必次．多日期：）ｆ巧要白及属（执ｗＷａＲｅｉｄｉｂ．ｆ．）是兰科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）地生草本植物，具有较高的药一种传统的中药材用价值和观赏价值。其假鱗茎是，具有敛气、渗疾、止血、消痴等功效，白及属广泛分布于亚洲国家，其在中国共有四个种，分别是白及（風ｅ说／ａ如Ｔ吐Ｇ如’’杠（ｈｕｎｂ．）．Ｒｅｉｃｈｅｎｂａｃｈ）、

4、华白及（公／航ｒｗＭｃｍｗ取〇肪）Ｓ沈１．）、黄花白及（公／地仏ａｏｃ＆ｒａｃｅｆｌＳｃＭｔｒ．）和小白及（公／如舶ｒ於ｒｗｃｗｉＭ幻（Ｈａｙａｔａ）Ｓｃ：ｈｌｔｒ．）。白及种子的自然萌发率低，加之人类对生境的破坏和过度的采挖，白及植物野生资源遭到严重破坏，对其野生资源的保护迫在眉睫。而本研究为白及野生资源的开发利用和保护提供了理论依据。本论文首先通过单因素和多因素对白及假鱗茎的诱导进行研究。实验结果表明：ＭＳ做为基础培养基，最适宜白及假鱗茎的诱导，活性炭浓度为１．０ｇ／Ｌ时对假鱗茎促

5、进的效果最佳；不同添加物、ＮＡＡ、６书ＡＷ及ＰＰ３３３对于假鱗茎的诱导率影响大小＞ＰＰ＞－＞６ＢＡ＞ＮＡＡ对于假鱗茎粒径影响大小则为６－８乂＞？？添依次为：添加物３３３：；３３３＞ＮＡＡ－加物。综合Ｗ上白及假鱗茎诱导最佳培养基为：ＭＳ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋ＰＰ３３３０．５ｍｇ／Ｌ＋香蕉泥１０．０ｇ／Ｌ＋活性炭１．０／Ｌ。ｇ本论文还利用序列相关扩増多态性ＳＲＡＰ分子标记建立白及属ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反（）应体系，对影响该体系的ＤＮＡ模板、引物、Ｔａｑ酶和ｄＮ

6、ＴＰ等因素进行优化，并对２２－Ｘ份白及属样本进行了鉴定ＰＣＲ反应体系：１０。确定了适合白及属的２０叫＾ＳＲＡＰＴａ酶的配套缓冲液（１０Ｘｂｕｆｅｒ２．０，ＭＣｌ１．５ｍＭ，Ｔａ１．５Ｕ，ｄＮＴＰ０．４ｍＭ，ｑ）阵ｇ；ｑ酶正、反引物各０．４ｎＭ，ＤＮＡ模板２０ｎｇ。利用筛选出的１２对引物对２２份样本进行分析，共筛选出１８９条多态性条带，表明白及属具有较高的遗传多样性，通过ＵＰＧＭＡ聚类法能够把白及、小白及和黄华白及良好的区分开来，四份待检晶经鉴定为白及。本文最后通

7、过ＳＲＡＰ分子标记探讨了１２个白及野生居群的遗传多样性和居群遗１８对ＳＲＡＰ引１５３份样本扩增２９４，传结构。实验结果表明，物对对，获得条条带２４０条＝其中多态性条带有（８１．６３％），白及物种有着丰富的遗传多样性（ＰＰＢ９０．４８％，＝＝＝Ｈ０３４９４１０５０９６０２６０９．．，遗传分化指数＆．，，白及居群间存在中等水平的遗，）传分化。ＵＰＧＭＡ聚类分析中１２个居群分为Ｈ大支，我国东部江苏南京、江苏镇江、４个一安徽宣城和浙江杭州居群聚为支，中部湖北、湖南、江西ｙｊｌ及贵州７个居

8、群聚一一理距离和遗传距为大支，西部云南文山单独聚为支。通过Ｍａｎｔｅｌｔｅｓｔ检测，地＝离之间有明显正相关性（ｒ化６３２９；ｐＯ．ＯＯＯｌ）。本文为白及野生种质资源的就地保护和迁地保护提供了参考依据。Ｉ关键词；白及，假鱗茎诱导，ＳＲＡＰ分子标记，品种鉴定，遗传多样性，居群遗传结构打Ａｂｓｔｒａｃｔ