丹参注射液对自体脂肪移植存活率影响的实验与临床研究

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1、丹参注射液对自体脂肪移植存活率影响的实验与临床研究ExperimentalandClinicalResearchontheEffectsofSalviaMiltiorrhizaontheSurvivalofAutologousAdiposeTissueTransplantation作者：余力指导老师：张如鸿教授学科（专业）：外科学（整复外科）答辩日期：2015年10月29日基金项目：大容量移植脂肪转归及增效技术的前瞻性研究研究方向：整形外科，脂肪移植申请学位：博士培养单位：上海交通大学医学院IIIIII中文摘要先天性和后天性的组织缺损的修复是整形外科的难

2、点和重点。缺损的组织类型各[1-4]种各样，但是其中重要的组成部分是皮下脂肪。整复外科通常应用各种组织的移植、充填方法，来修复软组织缺损患者的畸形缺损。临床上常用的充填软组织的材料有自体组织和人工合成材料两种。由于合成人工材料有组织相容性差，轮廓感明显、非永久性植入等缺陷，而限制了其更广泛的应用。脂肪组织是一种常用的自体软组织修复材料。其游离组织移植亦是整形外科最常用的组织修复方法之一。它具有来源丰富，取材容易，疤痕隐蔽，操作简单，组织相容性好而无异物排斥反应等优点，然而，自体脂肪移植其较高且难以预测的吸收率是其固有的缺点，虽然一系列涉及脂肪移植、提高脂

3、肪成活率的新技术和方法获得较为广泛的认可。但是脂肪移植存活率仍不尽如人意且治疗效果不可确定仍存在。极大地限制了其在临床上的广泛应用。脂肪细胞自身耗能高而对缺血、缺氧耐受力较差，游离移植后其需迅速从受区获得足够的营养供应。在移植物与宿主建立充分的血供之前，脂肪组织只能靠周围组织液的浸润和渗透来维持营养供应，而这种供应的距离是极为有限的。超过该距离就需要生成新的血管来提供营养，然而自发的血管生成速度每天只生长十几微米，一般要在移植后[10,11]5天逐渐长入，并且新生血管只能侵入移植物的周边部位，这时中央部分的脂肪组织已经发生了细胞坏死、脂肪液化。由此可见，

4、、尽早建立充分血供，以促进游离移植脂肪组织的再血管化是问题的关键。为加快移植体内血供的重建，从而增加移植体血供，缩短脂肪细胞缺血周期，学者们做了许多深入研究。其中较有代表性的研究方法大致包括：ASC，SVF，BRAVA的应用等等。虽然他们获得了令人鼓舞的效果，但存在的体外培养，操作繁琐，易污染，消耗大量可充填脂肪组织，患者依从性差等局限性。同时即使应用了这些辅助手段，大IV容量脂肪移植的成活率仍不足以令人满意。本研究通过动物实验和临床研究，观察在使用丹参注射液的情况下，自体游离脂肪移植的大体和组织学等方面的变化，游离移植脂肪中毛细血管数量和密度的变化趋势

5、，从而评估中药制剂对脂肪颗粒移植物成活率的影响，为临床通过利用该技术手段，提高自体脂肪移植成活率提供实验及临床研究依据。探讨提高移植脂肪成活率的新途径。目的：1.探讨丹参注射液对自体脂肪移植存活率的影响2.筛选提高自体脂肪移植存活率的中药制剂3.研究丹参注射液在自体脂肪移植隆乳中应用的有效性方法1.以大白兔自体脂肪游离移植动物为模型，分为实验组和对照组，分别予以腹腔注射丹参、黄芪注射液，通过以下方法探讨对自体游离移植脂肪的作用。（1）Elisa法，在不同时间点测定血清VEGF表达水平（2）术后第2、4、12周取材，精密天平测量移植体残余质量，计算脂肪移植

6、存活率（3）H&E染色，光镜下观察组织细胞形态，并作半定量分析。（4）免疫组化染色内皮细胞因子CD31观察毛细血管生长情况。（5）周脂素免疫组化染色观察移植脂肪细胞活性。2.自体脂肪移植隆乳术中分实验组和对照组，实验组应用丹参注射液每天一次，共4周。随访3个月，通过以下方法探讨丹参注射液在自体脂肪移植隆乳中应用的有效性。（1）三维扫描（KonicaMinota,Vivid910）测量脂肪移植术前后体积，并计算乳房体积增大率、脂肪存活率和乳房体积增加率。（2）Hochest33342和周脂素免疫荧光染色观察移植脂肪细胞活性。（3）vWF免疫荧光染色观察移植

7、脂肪中血管分布情况。V（4）BZ-XAnalyzer软件抽提vWF免疫荧光染色血管计数，计算每高倍镜视野下微血管密度。结果1.动物模型研究：(1)自体脂肪移植术后第12周，对照组与各实验组在移植脂肪重量上的差别均具有统计学意义；（2）ELISA结果表明中药各组在各时间点的血清VEGF表达水平均明显高于对照组；（3）H&E染色示中药组在脂肪细胞数量、形态均一性等方面均明显优于对照组；（4）内皮细胞CD31免疫组化染色示实验组的新生毛细血管多于对照组。实验组间比较，以黄芪组血管数量较多。（5）周脂素免疫组化染色显示实验组的移植脂肪细胞活性高于对照组。中药两实

8、验组比较，又以丹参组较多于黄芪组和丹参黄芪组。2.自体脂肪移植隆乳的临床研究：（