tgf-β1、mmp9及铁代谢变化在大鼠脑室出血后脑室损伤及细胞凋亡中的作用

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1、前言脑室内出血（Intraventricularhemorrhage，IVH）是指各种原因导致的颅内血管破裂，血液进入脑室系统引起的临床综合征，是临床常见急症之一，根据出血来源的不同IVH可分为原发性IVH和继发性IVH。原发性脑出血（intracerebralhemorrhage，ICH）患者合并IVH超过50%，而蛛网膜下腔出血（subarachnoidHemorrhage，SAH）继发IVH的发生率约为45%，脑出血后IVH是预后不良的[1-3][4]指标之一。原发性IVH的短期预后取决于病人的年龄及脑室出血的程度，[5

2、]国外报道原发性IVH急性期的死亡率高达36％，脑室出血导致的脑室扩张（ventricledilation）、脑积水（hydrocephalus），是导致本病急性期死亡的主要原因，也是其最常见的远期并发症，是预后不良的独立危险因素，发生率很高。研究发现55%自发性脑出血患者会合并IVH，而其中35%会出现脑积水，脑出血合并IVH会将预后良好的可能性从31.4%降到15.1%，而发生脑积水则进一步将[1]可能性降到11.5%。目前关于SAH后继发慢性脑积水的研究较多，但有关IVH后脑积水的发生机制，发展、变化过程的研究尚不多见，

3、IVH后脑积水至今仍缺乏有效的治疗手段。转化生长因子-β（transforminggrowthfactorbetal,TGF-β)是新近发现的调节细胞生长和分化的重要细胞因子，它可以通过刺激胶原基因过度表达及自分泌调控等多种机制促进ECM成分的合成而在纤维化病变过程中发挥关键作用。近年来TGF-βl过表达在中枢神经系统损伤后炎症反应、组织纤维增生及胶质瘫痕形成中的作用也逐渐被认识。重组TGF-βl鞘内注射及转基因大鼠均发生脑脊液引[6-9]流障碍，提示其可能在脑积水的发生中发挥重要作用。TGF-βl对中枢神经系统(CNS)损伤

4、后的修复具双向作用，研究TGF-βl疾病情况下异常表达规律及机制，保护正向作用，抑制其负向作用可以为防治组织纤维化、粘连性疾病如由于脑室出血导致的脑积水提供新思路。目前学者们对血液分解产物-铁离子在脑出血继发脑损伤中的作用进行了较[10-14]多的研究。动物实验证实：脑出血后铁超载可对脑组织产生继发性损害，而铁螯合剂-去铁胺能够透过血脑屏障进入脑实质，通过螯合作用清除铁离子和自[11,12][15,16][17]由基，进而减轻ICH继发的脑水肿、神经功能缺失以及DNA损伤，但对于IVH后铁代谢的变化规律、调节方式及其在继发性脑

5、室扩张、脑积水形I成过程中的作用还知之甚少，有待进一步阐明。Chen等向大鼠脑室内注射自体血，导致了铁沉积、脑积水和海马损伤，而去铁胺治疗可以减少IVH引起的脑[18]积水和海马损伤。Gao等向大鼠侧脑室分别注射自体全血、肝素抗凝血、凝血酶、凝血酶+凝血酶受体抑制剂，发现自体血注射较肝素抗凝血更能诱导IVH后脑积水的发生，单纯凝血酶注射在引起严重脑积水的同时还可以导致脑室壁损伤、脑室周围血脑屏障破坏，而凝血酶引起的脑积水可以被同时注射凝血酶受体抑制剂减轻，提示凝血酶可以通过凝血酶受体在脑积水的发生、发展过程中起重[19]要作用

6、。本研究分四部分：一、IVH大鼠模型的制备及IVH后脑室损伤：自体尾动脉血二次注射法制备大鼠IVH模型，大体、HE染色及电镜下观察脑室壁及脑室周围组织结构变化；二、TGF-β1、MMP9在大鼠IVH后脑室损伤中的作用：动物模型制备同第一部分，1.荧光实时定量PCR法检测各时间点脑室周围组织TGF-β1mRNA水平；2.Westernblot法检测各时间点脑室周围组织MMP9表达变化；探讨IVH后TGF-β1、MMP9的变化规律及其在IVH后脑室损伤中的作用。三、IVH后铁代谢相关分子变化规律及其在脑室损伤、细胞凋亡中的作用：模

7、型制备同第一部分，1.红菲绕啉法测大鼠血清及全脑非血红素铁含量；2.荧光实时定量PCR法检测各时间点脑室周围组织Tf、TfR1、DMT1，IRP2mRNA水平；3.免疫荧光染色、Westernblot法检测脑室周围组织各时间点Fn、Tf、TfR1、DMT1、IRP2蛋白表达变化；4.Tunel染色及8-OHdG免疫荧光染色法检测海马及脑室周围组织DNA损伤情况。三、去铁胺治疗对IVH后脑室损伤及细胞凋亡的保护作用：模型制备同第一部分，造模后治疗组肌肉注射去铁胺，对照组注射同体积生理盐水，术后7天：1.电镜下观察脑室璧结构变化；

8、2.Tunel染色法检测各组脑室周围组织细胞DNA损伤情况。II中文摘要目的：观察IVH后TGF-β1、MMP9及脑内铁代谢的变化，探讨其在IVH后脑室损伤及细胞凋亡中的作用。方法：（1）健康雄性Wistar大鼠84只，随机分为：正常组，盐水对照组术后1d、3d、7d、28d