狐尾藻化感物质的提取工艺优化及其急性毒性研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120150386上海海洋大学硕士学位论文题目：狐尾藻化感物质的提取工艺优化及其急性毒性研究英文题目：OptimalextractionprocessofMyriophyllumspicatumallelochemicalanditsacutetoxicity专业：渔业研究方向：环境化学和环境毒理学姓名：赵金涛指导教师：江敏教授二零一五年四月十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包

2、含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：赵金涛日期：2015年6月23日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密√学位论文作者签名：赵金涛指导教

3、师签名：江敏日期：2015年6月23日日期：2015年6月23日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注臧维玲上海海洋大学教授主席房文红东海水产研究所研究员委员戴习林上海海洋大学教授委员委员委员委员吴昊上海海洋大学实验员秘书答辩地点图书馆604答辩日期2015.6.4上海海洋大学硕士学位论文狐尾藻化感物质的提取工艺优化及其急性毒性研究摘要近年来，环境污染日趋严重，水体富营养化不断加剧，水华频繁，铜绿微囊藻（Microcystisaeruginosa）作为常见水华蓝藻，给人们生活和工农业发展带来严重威胁。本研究以狐尾藻（Myriophyllum

4、spicatum）茎部化感物质为研究对象，分析超声波-纤维素酶法提取狐尾藻化感物质的最佳工艺条件，探讨提取液对铜绿微囊藻细胞抗氧化酶系统的影响以及斑马鱼的急性毒性。研究发现超声波-纤维素酶提取液能快速有效的抑制铜绿微囊藻的生长，破坏藻细胞抗氧化酶系统，杀死藻细胞，但是对斑马鱼为低毒性物质，为今后进一步的研究提供一定的理论支持。采用超声波-纤维素酶法提取狐尾藻的抑藻成分，以提取液对铜绿微囊藻的生长阻碍率为评价指标，通过单因素和正交试验获得提取狐尾藻粗提液的最优工艺条件：酶解时间为4h，最适pH为3.0，温度为30℃，酶用量（纤维素酶质量/藻粉质量）为21%，超声波功

5、率为120W，超声时间为1h。无水乙醇试剂空白对铜绿微囊藻的生长无明显影响。在最优工艺条件下，超声波-纤维素酶狐尾藻提取液对铜绿微囊藻的生长阻碍率远远高于水浸提液对铜绿微囊藻的生长阻碍率，两者存在显著性差异（P＜0.05）。与水浸提液相比，仅低浓度组（5g/L、10g/L）在7d后对铜绿微囊藻抑制作用消失，其他各组仍保留着比水浸提液更高的抑制能力，尤其是在提取液浓度为40g/L，反应时间为24h时，超声波-纤维素酶提取液对铜绿微囊藻的最大生长阻碍率为271.74%，而水浸提液对铜绿微囊藻的生长阻碍率只有129.78%。超声波-纤维素酶狐尾藻提取液作用于铜绿微囊藻，

6、随着反应时间的延长和提取液浓度的升高，铜绿微囊藻T-SOD活力、CAT活力和MDA含量12h内快速下降，12h后下降速率减慢，尤其是高浓度I上海海洋大学硕士学位论文组（30g/L、40g/L）T-SOD活力、CAT活力和MDA含量96h时趋于0；随着浓度升高，T-SOD活力、CAT活力和MDA含量与提取液浓度呈负相关，与对照组相比，各浓度组均存在显著性差异（P＜0.05）。狐尾藻水浸提液和超声波-纤维素酶提取液对斑马鱼急性毒性研究中，水浸提液和超声波-纤维素酶提取液各浓度组斑马鱼存活率均高于对照组存活率，尤其是超声波-纤维素酶提取液各浓度组斑马鱼存活率在反应120

7、h内均为100%，对斑马鱼存活率无影响。根据化学物质对鱼类和水蚤的毒性等级评价可知，水浸提液和超声波-纤维素酶提取液对斑马鱼均为低毒性物质。因此，超声波-纤维素酶提取液对于生态系统是安全的，可被用于生产实践中去除水华，保护水生生态系统，保护环境。关键词：铜绿微囊藻，化感物质，斑马鱼，超声波-纤维素酶，狐尾藻II上海海洋大学硕士学位论文OptimalextractionprocessofMyriophyllumspicatumallelochemicalanditsacutetoxicityABSTRACTInrecentyears,withtheincreasin

8、gofpo