盐藻多糖提取工艺的研究

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1、中国海洋大学学报第35卷第6期35（6）：991~9932005年11月PERIODICALOFOCEANUNIVERSITYOFCHINANov.，2005盐藻多糖提取工艺的研究✷韩玉谦1，隋晓1，2，蒋新1，李慧霞1（1.中国海洋大学国家海洋药物工程技术研究中心，山东青岛266101；2.青岛大学生物系，山东青岛266071）摘要：探讨盐藻D.peircei多糖的提取工艺。采用正交实验确定了提取盐藻粗多糖的最佳工艺条件，通过酶解方法脱除其蛋白。实验结果表明，提取盐藻粗多糖的最佳工艺条件为100࠷，提取10h，固液比1:16，pHE9，通过中性蛋白酶对其酶解，可脱除其部分蛋白，使糖含

2、量达到29.01%，初步确定此多糖为含有硫酸基和己糖醛酸的蛋白多糖。关键词：盐藻多糖；正交设计；提取工艺；酶解中图法分类号：Q946.3；Q556文献标识码：A文章编号：1672-5174（2005）06-991-03盐藻，也称杜氏藻（Dunaliellapeircei），是1种原机（上海安亭科学仪器厂），日立835-30型氨基酸分析生质裸露的嗜盐性浮游藻类，隶属于绿藻门绿藻纲团仪。藻目盐藻科盐藻属，为绿色单细胞藻，形体微小，缺少细胞壁，具有糖蛋白形成的包被。它主要分布在近海2方法水域，对盐度适应范围在0.2%~35%之间，具有繁殖2.1提取粗多糖方法快，生活力强，适于养殖等特点。盐藻

3、中含有大量的甘称取200g干藻粉，加入一定量水，搅拌均匀，用油、胡萝卜素、蛋白质、多糖类化合物和微量元素等一40%的NaOH溶液调至一定的pH值（弱碱性），在一系列可利用物质［1］。定温度下，水浴加热提取数小时后，过滤。滤液调pH从杜氏藻中提取甘油和胡萝卜素是目前研究开发E5去酸性蛋白，离心得上清液，减压浓缩，在不断搅拌的热点，而且已形成了产业化，提取过β-胡萝卜素后的下加入乙醇，使溶液的乙醇含量为75%，醇沉，静置过盐藻藻渣虽含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质等营夜。离心得到沉淀物，将沉淀物用5倍水溶解，离心取养成分，却一直没有得到很好的利用。盐藻藻渣还含上清液，加入乙醇，使溶液的乙醇

4、含量为75%，醇沉，离有约10%多糖类化合物，文献［2］报道盐藻多糖能与完心后将沉淀物冷冻干燥，得到白色粉状粗多糖PDS，1全福氏佐剂一样有明显增强机体免疫的功能和具有抑称重，测糖含量和蛋白含量。制S180肿瘤细胞的增殖功能，其抑瘤率高达57%。2.2正交实验法提取盐藻多糖本文对已提取过胡萝卜素的盐藻藻渣中多糖类化实验预试发现，提取用水量、温度、时间、溶液的合物的提取工艺进行了研究，对于盐藻的充分利用，以pH值为影响盐藻多糖提取得率的主要影响因素，以此及盐藻多糖的进一步研究与开发提供基础。设计四因素三水平正交实验表［3］。1仪器与试剂表1四因素三水平正交实验表L（3）49盐藻藻渣粉（内

5、蒙古兰太实业股份有限公司）；乙Table1Thefactorsandlevelsoforthogonal4experimentaldesignL9（3）醇（分析纯）；苯酚（特级纯）；硫酸（分析纯），中性蛋白酶（无锡酶制剂厂）；胰蛋白酶（上海化学试剂公司）；木水平因素Factors瓜蛋白酶（北京双旋微生物培养基制品厂）；UV2501LevelA温度B时间C固液比D紫外分光光度计（日本岛津公司）；FD-1C冷冻干燥机Temperature／࠷Time／hSolidtoliquidratiopH（北京博医康实验仪器有限公司）；HD-970紫外检测器17061:129（上海精科实业有限公司）；

6、RE-52A旋转蒸发仪（上海28581:1610亚荣生化仪器厂）；PHS-25数显pH计（上海精密仪器3100101:2011厂）；水浴锅（龙口先科仪器公司）；GL-20G-Ⅱ冷冻离心✷收稿日期：2005-07-04；修订日期：2005-10-28作者简介：韩玉谦（1962-），男，博士，教授。E-mail：hanyuq@tom.com992中国海洋大学学报2005年2.3酶水解粗多糖的实验表2正交实验结果4将PDS溶解于3倍水中，按溶液量的5%添加各Table2TheexperimentresultsofL9（3）orthogonaldesign1种水解酶（预先将溶液的pH调整至酶的

7、适宜范围），于实验号温度时间固液比PDS1得率50࠷酶解48h，酶解过程中保持溶液pH值的稳定。NumberTemperatureTime／hSolidtopHRateof90࠷灭活酶，离心分离，将上清液浓缩，不断搅拌下加／࠷liquidratioextraction／%入乙醇，使溶液的乙醇含量为75%，醇沉，离心后将沉111112.208淀物冷冻干燥，得到多糖PDS2，称重，测糖含量和蛋白212222.275含量。313331.4552.4P