桔小实蝇老熟幼虫湿度感受基因的功能研究

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1、硕士学位论文桔小实蝇老熟幼虫湿度感受基因的功能研究作者姓名许仁朝学科专业农业昆虫与害虫防治指导教师林进添教授所在学院农学院论文提交日期2015年4月学位论文原创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导F进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描

2、等复制手段保存、汇编学位论文。同意学校将本人的学位论文提交淸华大学中M学术期刊（光盘版）电子杂志社全文出版和编入CNKI《中H知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。（保密的论文在解密后应遵守此规定）本学位论文属于：□保密，在_____年解密后适用本授权书。+保密，同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览。(请在以上相应方框内打‘吵’）IdentificationandFunctionalAnalysisofhumidityreceptorgenesinBactroceradorsalis’sthirdinstarlarvaeADis

3、sertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：XuRenzhaoSupervisor：Prof.LinJintianZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringGuangzhou,China分类号：S4学校代码：11347学号：20122090402002仲恺农业工程学院硕士学位论文桔小实蝇老熟幼虫湿度感受基因的功能研究作者姓名：许仁朝指导教师姓名、职称：林进添教授学科专业名称：农业昆虫与害虫防治研究方向：昆虫分子生物学论文提交日期：2015年4月15日论文答辩日

4、期：2015年5月26日学位授予单位：仲恺农业工程学院学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：刘开启委员：马骏、贺华良摘要环境湿度对昆虫的发育、繁殖及生存有很严重的影响，能造成害虫不同的发生时期、发生数量和危害程度。昆虫感知环境湿度的能力是其在自然界生存的重要生物特征之一，昆虫体积较小且能敏感地感知环境中湿度的变化，是研究湿度感知能力的最好模型之一。桔小实蝇Bactroceradorsalis(Hendel)是一种世界性检疫害虫，有很广泛的寄主范围，主要危害柑橘、香蕉等40多个科的250多种作物果实。目前桔小实蝇的防治策略仅局限于化学防治和雄虫诱杀技术，而

5、且这些防治方法很难取得较好的防治效果，严重影响了蔬菜水果产业的发展。事实上，桔小实蝇三龄老熟幼虫依赖湿度感知进行化蛹，假设阻隔其选择合适的湿度环境化蛹的过程，有望在此重要环节对其实施防治。本文从桔小实蝇老熟幼虫的弹跳行为出发，以期在分子水平上研究其对沙土湿度的感知机制，湿度感受相关基因有望成为潜在的防治靶标基因，从而为防治桔小实蝇提供新的防治策略。本研究以桔小实蝇老熟幼虫为试虫，鉴定老熟幼虫可能与湿度感受相关TRP（TransientReceptorPotential）家族基因，并验证相关基因的功能。研究结果如下：1、桔小实蝇TRPPainless基因全长的

6、获得及生物信息学分析本研究通过快速末端扩增技术（RACE）和基因克隆技术获得两条湿度感知相关的TRPPainless基因全长BdorTRP1、BdorTRP2。BdorTRP1基因cDNA包括2793bp的开放阅读框，编码930个氨基酸。BdorTRP2基因cDNA包括2796bp的开放阅读框，编码931个氨基酸。通过序列比对和同源性分析表明，全长基因编码的蛋白序列与已知黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)、地中海实蝇(Ceratitiscapitata)、家蝇(Muscadomestica)的一致性分别为56%、88%、67%。与已知物

7、种的TRPPainless基因进行ClustalW对比分析得到五个保守结构域。同时预测到TRPPainless基因的氨基酸序列含有六个跨膜结构域。经系统发育分析得到：TRP基因按同源性可分为七个分支，分别是TRPA、TRPN、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP、TRPC。其中BdorTRP1和BdorTRP2高度相似，一致性为97.1%。同时与已报道的DemlWtrw湿度感知基因都属于TRPA家族，且与另一个属TRP家族的湿度感知基因DemlNan遗传距离较近。因此BdorTRP1和BdorTRP2基因可能介导桔小实蝇老熟幼虫的湿度感知机制。2、桔小实

8、蝇TRPPainless基因的功能研究I本研究采用R