杧果细菌性角斑病菌致病因子研究

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1、学校代码：学号：分类号：密级綠大營硕士学位论文题目：杧果细菌性角斑病菌致病因子研究作者：张大智指导教师：詹儒林研究员类别：学术型专业：微生物学时间：二一五年五月StudiseonPathogenicityFactorsofMangoBacterialLeafSpotPathogenAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinCollegeofEnvironmentandPlantProtectionByZhangDa-zhiSupervisor:ZhanRu-linMajor:Microb

2、iologySubmittedtime:May，海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：么日期：年石月”日学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用

3、户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：《长导师签名日期：；年；月引日日期：火本人己经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：年：口一年：口二年发布。论文作者签名：众次巧导师签名：日期：占年月力日日期：年月％摘要果细菌性角斑病由野油菜黄单胞菌杧果致病变种、引起，是果的主要病害之一。该病最明显的症状是感病叶片和果实

4、组织被分解，并出现明显的“十字交叉”病斑。国内外学者对该病菌的病原学、侵染规律及防治方法上取得一些研宄进展，但并不能根除病害，主要原因之一是其致病机理尚不清楚。针对该病菌具有分解寄主组织的特征，本研究从细胞壁降解酶、毒素和胞外多糖等致病因子角度开展其致病机制的研究，初步探讨相关因子在致病过程中的作用，以期为对该病害的有效监测和研发防控新技术提供理论依据。采用二硝基水杨酸法（法）测定病原菌侵染过程中细胞壁降解酶活性变化，结果显示：病原菌在改良的培养液和感病组织中均能产生种主要细胞壁降解酶，其中羧甲基纤维素酶（活性较高，多聚半乳糖醛酸酶（，果胶甲基半乳糖醛酸酶和葡萄糖苷酶次之，果胶甲基反式消

5、除酶和多聚半乳糖醛酸反式消除酶（较低。病原菌接种杧果叶片后，在病菌侵染前期（，葡萄糖苷酶和均有一个明显的酶活高峰；在病菌侵染后期、、和活性达到顶峰，而对照始终处于较低水平。对该病菌细胞壁降解酶产生条件进行优化，发现羧甲基纤维素钴（诱导效果最好，柑橘果胶诱导和效果最好。和的最适反应温度分别为°和°，最适反应时间分别为和当分别达到和时，酶和酶的活性最强。运用萃取及旋转蒸发的方法，从该病菌的培养滤液中得到淡黄色粗毒素液体。该粗毒素接种杧果叶片后，产生的病斑与病原菌一致，还能抑制水稻露白种子发芽。菌株产毒最优条件为之间的培养液，°培养。测定了粗毒素的热稳定性、蛋白与非蛋白部分等基本性质，明确该毒

6、素是一类具有热稳定性的非蛋白类物质。通过研宄粗毒素对杧果组织生理生化指标的影响，发现粗毒素侵染杧果叶片后，能激活寄主体内过氧化物酶、多酚氧化酶（、过氧化氢酶（和苯丙氨酸解氨酶（活性。感病叶片可溶性蛋白、可溶性总糖含量显著升高，而叶绿素含量降低，由此表明，该粗毒素对杧果组织有毒害作用。利用高效液相色谱分析菌株胞外多糖水解物的组成成分，结果显示：纯化的胞外多糖为白色粉末状物质，经高效液相色谱测定，初步推断其为乳糖。并对胞外多糖水解物进行生物活性检测，其结果与病原菌所致症状一致。以上结果表明了细胞壁降解酶、毒素和胞外多糖均为杧果重要的致病因子，在病菌的入侵、降解、毒害、损伤寄主组织中起到了关键

7、的作用。关键词：杧果细菌性角斑病；细胞壁降解酶；毒素；胞外多糖AbstractMangobacterialleafspotisoneofthemostimportantdiseasesofmango,causedbyXanthomonascampestrisip.mangiferaeindicae^resultingabnormaldecompositiononinfectedleavesandfruittissue.Also，，