抗肝纤维化新型异喹啉类化合物的筛选及机制研究

《抗肝纤维化新型异喹啉类化合物的筛选及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学医学院硕士学位论文抗肝纤维化新型异喹啉类化合物的筛选及机制研究作者姓名：王军指导教师：李光明副教授学科专业：内科学研究方向：消化内科基金项目：国家自然科学基金项目（81070344）培养单位：新华医院申请学位：硕士学位学号：1127229322答辩日期：2015年5月6日TheMasterDegreeDissertationofShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicineThescreening,studyonthemechanismsofnovelantiliverfibrosisis

2、oquinolinesynthesesAuthorname:JunWangSupervisor:GuangmingLi,AssociateProfessorAcademicMajor:InternalMedicineResearchField:DepartmentofGastroenterologyFunding:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81070344)Institute:XinhuaHospitalDegreeApplied:MasterDegreeStudentNumber:1

3、127229322OralDefense:06/05/2015上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2015年5月10日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文

4、的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2015年5月10日日期：2015年5月10日上海交通大学医学院硕士学位论文抗肝纤维化新型异喹啉类化合物的筛选及机制研究摘要背景与目的：活化的HSC凋亡障碍是肝纤维化难以逆转的主要原因。异喹啉生物碱具有明显细胞毒作用，可显著诱导肿瘤细胞凋亡。为了保留异

5、喹啉生物碱促凋亡活性并降低其细胞毒性，与复旦大学化学系合作，我们构建了新型异喹啉类小分子化合物库。本课题的目的是从新型异喹啉类小分子库筛选出细胞毒性低促凋亡生物活性强的具有抗肝纤维化作用的新型异喹啉小分子化合物，由此希望研发出一类新型抗肝纤维化药物先导化合物。方法：小分子化合物的筛查：（1）将复旦大学化学系合成的小分子化合物分类整理。（2）MTT法检测不同小分子化合物不同浓度（0μg/ml,2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml）处理HSC-T6细胞24小时后，HSC增殖改变，并计算

6、IC50值。（3）Hochest法检测上述筛选出的阳性化合物（IC50<100μg/ml）对HSC-T6细胞凋亡能力的影响。12-4-Y促HSC凋亡机制的探索：（1）MTT法检测不同浓度12-4-Y处理HSC-T6不同时间(12h、24h、36h、48h)后HSC增殖变化，台盼蓝染色评估细胞活力；（2）Hoechst染色检测凋亡小体；（3）流式细胞术对细胞凋亡进行定性检测；（4）检测凋亡关键蛋白Caspase3及其活化形式的表达变化；（5）RealtimePCR检测凋亡相关基因表达变化。结果：（1）MTT结果提示，所构建的类天然小分子化合

7、物库中存在6种化合物（12-4-Y、12-1-Y、09-4-Y、15-1-Y、11-2-Y、09-3-Y）对HSC-T6细胞增殖有明显的抑制作用，并且呈浓度依赖性，这6种阳性化合物的IC50值都在100μg/ml以内。（2）Hochest染色结果显示，上述阳性化合物中有1种化合物处理HSC-T6后可见明显的凋亡小体。这种化合物的编号为12-4-Y（1-乙基-8-甲氧基-5苯基吡唑并[5,1-a]异喹啉）。（3）进一步以不同浓度的12-4-Y处理HSC-T6细胞株后，MTT显示12-4-Y在12-48h及5-80μg/ml范围内可呈时间及浓

8、度依赖性抑制HSC-T6增殖，台盼蓝染色显示40μg/ml12-4-Y处理HSC-T6细胞系12h后细胞蓝染（0.53±0.04）%，与对照组（0.98±0.02）%相比明显增多（P<0.05