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时间:2019-03-13
《巨型艾美耳球虫emgam56基因在毕赤酵母中的表达及其免疫保护性研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、c-':苗批?巧朱弁作户:巧--?--、.W、?,X?一、―,中.、^:中___今:又蓮咬之>>.'-j一私-分类号三护為学号M誦6兵―’疋v\、,輩舆作沪如巧袜分汽、l^'—^、"皆.:义令轉'^《^苗考苗4叫义葦懲載务‘IhYANGZHOUUNIVERSITY-為"'八/:)衣擊心/量妾综壬学隹冷文?j硕;#數每‘琴一.'/.熱巧说"姻‘淨卢如(学未型)巨聖巧美耳球虫Em抑W56基因在毕赤醇母中的表达^及其免疫保妒性研究石V‘?J、。
2、非主’一金''-.?、心;---巧泉K邓长静心—該气'’一一、^.、-^,禾‘/,私-指导教师姓名:陶建平教授亡气,.,扬州大学,江苏扬州,225009!1^申请学位级别:硕壬学科专业名称:预防善医學论文提交日期:2015年4月论文答辩日期;2015年6月―奇学位授予单位:扬州大学学位授予日期:.:争t:^答辩委员会主席:^^或、嗦扳怒貞??,.*,‘、^-聲义、如榮二^,、^如之違軒汚?,C叛户之邊岭1..一輸:一:六讀霸邓长静:巨型艾美耳球虫基因
3、在毕赤酵母中的表达及其免疫保护性研巧1_巨型艾美耳球虫基因在毕赤醇母中的表达及其免疫保护性研究中文摘要一鸡球虫病是由多种艾美耳球虫(投weWa)寄生于鸡肠道黏膜上皮细胞内所引起的种寄生原虫病,不仅引起鸡发病死亡,还可严重影响鸡的生长发育,降低饲料报酬。目前鸡球虫病的防治主要依靠化学药物,其次是鸡球虫病活疫苗。随着抗球虫药物的广泛与大量使用,球虫耐药性W及人们对药物残留肉蛋、污染环境等诸多问题也随么出现。同时活球虫疫苗又存在生产成本高、容易扩散病原、容易引起肠炎发生等弊端。为此,亚单位疫苗?己成为鸡球
4、虫病疫苗的发展方向。CoxAbic是由巨型艾美耳球虫(丘wax加a)配子体蛋白EmGam56一、EmGam82和EmGam230组成的种亚单位疫化在其生产过程中需从感染鸡体分离纯化配子体,然后再用亲和柱层析的方法分离纯化配子体蛋白,因此生产费时、成一本昂贵。利用基因重姐技术研制基因工程疫苗可能解决这难题。己斯德毕赤酵母表达系统是一种真核表达系统,不仅具有操作简单、生长速度快、发酵成本低廉等优点,还具有高等真核表达系统的蛋白翻译后的加工修饰功能,该系统所表达产物的免疫学活性和生物学功能与天然蛋白质更为接近。因此,本研
5、充在己斯德毕赤酵M母中表达了wax如f配子体蛋白基因,检测了酵母表达蛋白rEmGam56的抗原特异性和免疫原性,并通过动物免疫保护试验比较分析了酵母表达蛋白rEmGamW和原核表达蛋白rEmGam56对怎.wax細0的免疫保护效果,为重姐配子体抗原亚单位疫苗的研制奠定基础。1.巨型艾美耳球虫Emga/M56基因的毕赤酵母表达及其巧步鉴定根据Emgflw%基因去除信号化后的ORF序列和真核表达载体pPICzaA的酶切位点设一-计对特异性引物GEMT-Emaw56为C民扩增出,W本实验室保存的重组质粒pg模板
6、,PaA-目的片段,插入表达载体pPICz中,构建重组表达质粒pPICzaAEmgow56。对酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,将连接正确的重组质粒线性化后用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115,利用博莱霉素(Zeocin)抗性筛选多拷贝重组菌株,摇瓶水平进行诱导表达,所得蛋白大小约为11.6kDa,且能被6XHIS单抗识别。2.巨型艾美耳球虫毕赤酵母重组表达蛋白rEmGam56的免疫原性分析n扬州大学硕±学位论文分别W鼠抗醇母表达蛋白rEmGani56多克隆抗体、鼠抗原核表达蛋白正mGam56多克
7、一-.抗隆抗体和左wax加<3鸡康复血清为,对酵母表达蛋白rEmGam56进行Westemblot检额!I,结果显示该蛋白具有良好的免疫原性。W酵母表达蛋白rEmGam56为抗原,用间接化ISA方法检测鼠抗酵母表达蛋白正mGam56多抗、原核表达蛋白rEmGam56多抗和鸡康一复血清,显示该重组蛋白能刺激机体产生定的抗体水平,并且能识别鸡康复血清中的特异性抗体。义巨型艾美耳球虫毕节酵母重组表达蛋白rEmGam56的免疫保护效果、、、维鸡为试验动物,W死亡率相对增重率病变记分减少率与相对卵囊产量细胞免疫和体液
8、免疫水平等为评价指标,对酵母表达蛋白rEmGam56的免疫保护效果进行了初rEmGa56;步研究,并与原核表达蛋白m和卵囊的免疫效果相比较。结果显示酵母表达蛋白高剂量组(60ng/羽
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