巨噬细胞可通过直接和交叉途径启动抗布鲁菌s_2的细胞免疫应答

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20100013医学硕士学位论文巨噬细胞可通过直接和交叉途径启动抗布鲁菌S2的细胞免疫应答学位申请人:冯娜指导教师:曹志然教授学位类别:医学硕士学科专业:药理学授予单位:河北大学答辩日期:二○一五年十二月ClassifiedIndex:CODE:10075U.D.C:NO:20100013AdissertationfortheDegreeofM.medicineThecellularimmuneresponsestoMacrophagesstartinganB

2、rucellaS2bydirectandcrosswaysCandidate:FengnaSupervisor:Prof.CaoZhiranAcademicDegreeAppliedfor:MasterofmedicineSpecialty:PharmacologyUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:December,2015納妖学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果

3、。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教一育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献巧已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。对作者签名＝期：■女年仪月日日学位论文使用授权声明Ｉ本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ；学校有权保留Ｉ＾。并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论丈被查阅和借飼学校可ｙ＞Ｊｌ公布论文的全部或

4、部分内容，可＾１［采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位论文属于１、保密□，在如皆年／厶月密后适用本授权声明。＿＿么１日解＇＂２、不保密回。＂＂（请在ＵＬｈ相应方格内打Ｖ）保护知识产权声明Ｉ本人为申请河北大学学位所提交的题目为化喧备骑罐ｔ去城神．的学位论文，是我个人在导师（知）指导并与导师合作下取得的研究成果，／研究工作及取得的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定

5、的各项法律、行政法规及河北大学的相关规定。本人声明如下：本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大容学的书面同意和授权，本人保证不壬何形式公开和传播科研成果和科研工作内。如果违反本声明，本人愿意承担相应法律责任。声明人：日期：立年ｆｘ巧日作者签名日期＝年Ｕ－月＿＿空＾日、飾／—＾导师签名：＿＿日期：山Ｉ、年月户日摘要摘要目的：本研究以我国常用的猪型减毒活疫苗S2株作为实验菌株，通过体外细胞共培养体系，研究S2株感染后对巨噬细胞的激活、对T细

6、胞的激活以及S2感染后死亡的巨噬细胞对树突状细胞的活化和诱导T细胞应答的检测，进一步阐明巨噬细胞启动抗布鲁菌S2的细胞免疫应答的途径。方法：1.以布鲁菌S2株体外感染小鼠腹腔巨噬细胞，并以未感染的正常细胞作为对照，感染后分别于24h、48h、72h后，ELISA法检测细胞上清中IL-12、TNF-α水平；2.正常巨噬细胞与T细胞共培养和S2菌感染后的巨噬细胞与T细胞共培养，分别于共培养后的24h、48h和72h，ELISA法检测各组上清中IFN-γ和IL-4水平；3.MΦ分为正常对照组和S2感染组，

7、用不含血清的RPMI1640培养液饥饿培养，待MΦ全部死亡与DC共培养，并设单纯DC对照组，ELISA法检测培养上清中IL-12、TNF-α。另取取沉淀的树突状细胞计数，与T细胞按比例共培养，分别于24h、48h、72hELISA法检测IFN-γ、IL-4含量。结果：1.S2菌株感染MΦ后各时间点培养上清中TNF-α和IL-12均明显高于正常对照组(p<0.01)；2.S2菌株感染后的巨噬细胞与T细胞共培养后，在检测的各时间点共培养细胞上清中IFN-γ均高于正常对照组(P<0.05)，但S2菌株感染

8、后巨噬细胞与T细胞共培养上清中IL-4分泌与正常组比较无统计学意义(P>0.05)；3.正常饥饿死亡的MΦ和S2株感染后死亡的MΦ与DC共培养组的TNF–α均明显高于正常DC组TNF–α的分泌水平(P<0.05)，而S2株感染后死亡的MΦ与DC共培养组TNF–α又明显高于正常饥饿死亡的MΦ与DC共培养组(P<0.05)，各时间点均未检测到IL-12分泌；4.正常死亡MΦ+DC+T组和S2感染死亡的MΦ+DC+T组上清中IFN-γ的水平均明I摘要显增高(P<0.05)，