小鼠肥大细胞应答布鲁菌感染的分子机制及效应研究

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1、万方数据分类号：S曼51：2密级：公珏学2011430小鼠肥大细胞应答布鲁菌感染的分子机制及效应研究StudyoftheMolecularMechanismandeffectofMastCellResponseinMiceBrucellaInfection学位申请人：谷玉静指导教师：郝满良副教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一四年五月二十九日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过

2、的研究成果，也不包含为获得塑I垦壅些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名咯玉签字日期：乃1年年占月动日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑童垦壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑i垦盘些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)⋯一繇砖督一名：暂犏征

3、签字日期：乃fcF年g月抽日签字目期：bf午年岁月即日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：万方数据摘要

4、

5、IIIIIIIIIIIIIIlllIIIIIIIIfY2668395本试验旨在研究小鼠肥大细胞应答布鲁菌感染的分子机制及效应。本文采用体内和体外相结合的试验方法，研究布鲁菌感染所引起的MC的变化，TLRsmRNA表达的变化，血清中各种细胞因子表达的变化，以及对DCs分布的影响。体外试验使用P815株MC在培养板上进行培养，将处于对数生长期的布鲁菌s2株，S2WboA乒株分别按感染复数(MOI)1：100分别感染MC，并设正常对照组

6、(只加培养液)，于感染12h、24h收集细胞，RT-PCR检测TLR2、TLR4、TLR8、TLR9的表达。RT-PCR结果显示，布鲁菌感染MC后在mRNA水平引起了TLRs的变化，高于正常组，感染布鲁菌S2株组的TLRs的表达基本上都高于感染布鲁菌S2WboA斗株组，尤其是TLR4的表达，这可能与布鲁菌S2WboA^株不产生LPS有关。这种变化提高了细胞的抗原提呈功能，并促进各种细胞因子的分泌，从而增强机体抵抗布鲁茵感染的能力。体内试验将150只8周龄雌性BALB／c小鼠随机分为5组，每组30只。A组为PBS对照组；B组为布鲁茵s2株感染组；c组为布鲁

7、菌s2WboA斗株感染组；D组为清除MC后感染布鲁菌S2株组；E组为清除MC后感染布鲁菌s2、帕oA乒株组。分别在接种后lh，6h，12h，24h，48h，72h采取外周血液，分离血清，ELISA检测血清中的TNF—a、IFN—Y、IL一4的含量；颈椎脱臼法处死小鼠，收集阴道、髂内淋巴结、子宫，制作石蜡切片，甲苯胺蓝染色观察MC的变化；免疫组化观察DCs在阴道粘膜的分布。ELISA结果显示，布鲁菌感染增加了血清中的TNF—Q、IFN—Y、IL一4的表达，引起了显著的炎症反应，提示可能启动了以Thl免疫为主，Th2免疫为辅的免疫反应来抵抗感染；切片显示MC

8、数量没有明显增加，没有显示出一定的规律性，可能与个体差异有关；免疫组化显示DCs在感染6h、12h显著增多，提示可能是布鲁菌刺激DCs向淋巴结发生迁移，成熟并激活初始T细胞，启动T111免疫。结论：抗c．1(it抗体成功清除了小鼠阴道、子宫、淋巴结的MC；MC通过调节TLRs的表达，应答布鲁菌的感染，同时，明确了LPS在MC识别布鲁菌过程中的作用；MC通过分泌并调节不同的细胞因子，如TNF．a、TFN—y、IL一4等，启动Thl／Th2免疫，以Thl免疫为主，Th2免疫为辅，共同参与布鲁菌感染的免疫应答；清除MC后，机体通过其他途径或机制抵抗布鲁菌的感染

9、；DCs是布鲁菌的抗原提呈细胞，MC通过TNF．Q等活性物质的释放调节DCs的抗原提呈功能；布鲁菌S2株与布鲁菌S2WboA壬相比，虽然毒性较大，但是免疫效果较好。关键词：肥大细胞：布鲁菌；Toll样受体：树突状细胞。万方数据StudyoftheMolecularMechanismandeffectofMastCellResponseinMiceBrucellaInfectionGraduateCandidate：YujingGuAdvisor：Prof．ManliangHaoMajor：ClinicalVeterinaryMedicineAbstrac

10、tTheaimofthisexperimentwastostudythemole