姜黄素亚型b14对血管紧张素ⅱ引起肾小管细胞损伤的保护作用及其机制

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1、姜黄素亚型B14对血管紧张素II引起肾小管细胞损伤的保护作用及其机制TheprotectiveeffectandmechanismofcurcuminsubtypeB14toHK11cellinjuredbyangiotensintII作者姓名：程飞专业名称：外科学指导教师：安伟教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年6月2日前言糖尿病（diabetesmellitus，DM）是一组由于胰岛素分泌缺陷和/或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍

2、和衰竭。大量研究证实，糖尿病的发生发展与机体的氧化损伤以及抗氧化和清除自由基系统的失衡有关，同时，局部轻微的炎症反应也参与糖尿病的发病过程。糖尿病肾病（DiabeticNephropathy，DN）是糖尿病微血管病变的严重并发症之一，是导致终末期肾功能衰竭以及患者死亡的主要原因之一。大量实验及临床研究已经证明肾素—血管紧张素—醛固酮系统（RAAS）是糖尿病肾病重要发病机制，血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素受体拮抗剂在糖尿病肾病的治疗中已取得了较好的临床疗效。血管紧张素II是RAAS中活性最强的物质，在糖尿病肾病的发病发展过程中起重要作用。研究表明

3、，血管紧张素II通过相关机制促进肾脏炎症反应，激活氧化应激，造成血管内皮的损伤以及胰岛B细胞凋亡，从而对糖尿病及糖尿病肾病的发生发展起重要作用。姜黄素（Curcumin）是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素。为酸性多酚类物质，分子式为C21H20O6，同时具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗肿瘤、降血脂等多种药理作用，在中国和印度的传统医学中被广泛引用。由于姜黄素的疏水性结构，微溶于水，以及高代谢率，使得姜黄素的生物利用度较低，这使得姜黄素在临床应用的受到限制。近些年来，以姜黄素为先导化合物，设计、合成姜黄素结构类似物和衍生物，已成为国内外姜黄素

4、研究的热点。梁广等以姜黄素为先导物，设计合成出多种姜黄素类似物和衍生物，并对其活性进行检测，其中B14（C19H18O5）亚型有明显的抗细胞凋亡、抗I肿瘤活性。利用姜黄素及其类似物和衍生物的药理作用，使得临床研制一种对糖尿病及糖尿病肾病治疗的新型药物成为可能。本研究利用血管紧张素II在糖尿病肾病发病机制中的作用选用血管紧张素II来建造糖尿病肾病细胞模型。通过对姜黄素、姜黄素亚型B13、B14对糖尿病肾病细胞模型的保护作用进行比较，并对其相关机制进行探讨，为研究新型治疗糖尿病肾病药物提供理论依据。II中文摘要姜黄素亚型B14对血管紧张素II引起肾小管

5、细胞损伤的保护作用及其机制目的：观察姜黄素（Curcumin，Cur）亚型B14对血管紧张素II诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞（HumanKidney11,HK11）损伤的保护作用及其作用机制。方法：首先用细胞计数板和CCK-8比色法检测细胞的存活情况，以检验所选的姜黄素及其亚型B13、B14是否对HK11细胞具有毒害作用。然后用ELISA法检测不同浓度和不同时间条件下血管紧张素II对HK11细胞Cleavedcaspase-3蛋白表达的影响，以确定建立最佳糖尿病肾病细胞模型的血管紧张素II浓度和培养时间。最后利用此模型研究姜黄素亚型B14对HK11

6、细胞的保护作用及其机制。实验分为CON组、AngII组、B13组、Cur组、B14组、CON+PI3K抑制剂组、AngII+PI3K抑制剂组、B13+PI3K抑制剂组、Cur+PI3K抑制剂组、B14+PI3K抑制剂组，共十组。以ELISA法和Western-blot法检测Cleavedcaspase-3的表达情况，实验重复三次。结果:细胞计数及CCK-8比色法结果显示姜黄素及其亚型B13、B14对HK11细胞均无毒害作用（P＞0.05）；以AngII250nM培养48h时，HK11细胞Cleavedcaspase-3的表达量较空白组显著升高III

7、（p<0.05)；姜黄素组和B14组的Cleavedcaspase-3蛋白表达量下降，与AngII组相比差异具有显著性(p<0.05），以B14组的细胞凋亡降低最为明显（p<0.01）；给予PI3K抑制剂后，姜黄素+PI3K抑制剂组、B14+PI3K抑制剂组与姜黄素组、B14组相比Cleavedcaspase-3表达量均升高(p<0.05）。结论：姜黄素亚型B14对血管紧张素Ⅱ引起的HK11细胞损伤具有保护作用，且此种保护作用与PI3K信号通路有关。关键词:姜黄素，姜黄素亚型B14，AngII，糖尿病肾病，PI3KIVAbstractTheprot

8、ectiveeffectandmechanismofcurcuminsubtypeB14toHK11cellinjured