基于多杀菌素胁迫的桔小实蝇蛋白质组学初步研究

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1、学校代码：学号：分类号：密级：大營硕士学位论文作者：指导教师：彭研穷：员专业：农、丨虫与害虫防治时间：二—石年石月PreliminaryproteomicanalysisoftheBactroceradorsalis(Hendel)underspinosadstressAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgriculturalByBaiRong-rongSupervisor:PengZheng-qiangMajor:Agri

2、culturalentomologyandpestcontrolSubmitedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宂工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名曰期：义年女月学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保

3、留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：曰期：外年月乂曰本人己经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年；□一年；￥二年发布。摘要梧小实姆是我国

4、华南地区的重要果蔬害虫，可为害柑桔、芒果、番石榴、杨桃等多种果实，被许多国家和地区列为检疫性害虫。多杀菌素是在刺糖多胞菌发酵液中提取的一种大环内醋类无公害高效生物杀虫剂，既作用于烟碱型乙酰胆碱受体也作用于氨基丁酸受体能有效控制麟翅目、双翅目和缨翅目等多种害虫。目前，多杀菌素是生产上有效防治桔小实蝇的主要杀虫剂之一，但已有报道表明桔小实蝇对多杀菌素产生了一定的抗药性风险。因此，为了合理使用多杀菌素防治桔小实蝇发生与危害，延长多杀菌素的使用寿命，本研究将昆虫毒理学、生物信息学与蛋白质组学相结合，初步开展了基于多杀菌素胁迫的桔小实蝇蛋白质

5、组学研究，建立了桔小实蝇幼虫总蛋白的双向电泳条件，分离和鉴定了多杀菌素胁迫前后的桔小实蝇差异表达蛋白，为深入探讨多杀菌素的抗性形成机制研究奠定了基础。主要结果如下：建立并优化了梧小实娟幼虫总蛋白的双向电泳条件，确定使用的胶条对法提取的拮小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳，采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色为最适桔小实蝇蛋白质组学研究的方法，为开展基于多杀菌素胁迫的拮小实蝇蛋白质组学初步研究工作奠定了基础。比较了法和种丙酮法提取桔小实蝇幼虫总蛋白的效果，结果表明：法效果最好，可以获得±个蛋白点，且分离得到的蛋白点分辨率更高。比较了、的胶

6、条分离蛋白质的效果，发现使用胶条分离得到±个蛋白点，较胶条增加了个蛋白点。比较考马斯亮蓝染色与硝酸银染色的效果发现二者染色效果相当，但考马斯亮蓝染色背景较硝酸银染色干净清晰。质谱鉴定的胶中个特异的蛋白点以为检索物种可成功检索个，以为检索物种可成功检索个，且以为检索物种可获得更全面的信息。分离和鉴定了多杀菌素短时间胁迫前后的桔小实差异表达蛋白，发现所鉴定的蛋白主要参与物质能量代谢、免疫反应、解毒功能、细胞骨架生成等，为深入探讨桔小实蝇对低浓度多杀菌素胁迫的应答机制提供了基础信息支撑。采用浸渍法处理桔小实蝇龄老熟幼虫，浸泡时间浸泡后置于

7、土壤中。丙酮处理作为对照组，置于土壤后取样，多杀菌素处理作为处理组，分别置于土壤、后取样。获得丰度变化在倍以上的个差异蛋白点并进行了质谱鉴定，共鉴定出个，其中个上调表达，个下调表达。通过生物信息学分析，发现所鉴定的蛋白主要参与物质能量代谢、免疫反应、解毒功能、细胞骨架生成等，其中物质能量代谢相关蛋白所占比例最多，达到。3.分离和鉴定了多杀菌素长时间胁迫前后的桔小实蝇差异表达蛋白，发现所鉴定的蛋白包括物质能量代谢相关蛋白、防御或免疫相关蛋白、神经系统发展相关蛋白、细胞骨架蛋白及其它，为进一■步探讨诘小实绳对局浓度多杀囷素胁迫的应答机制

8、提供了基础信息支撑。采用浸渍法处理拮小实蝇龄老熟幼虫，浸泡时间，浸泡后置于土壤中。丙酮处理作为对照组置于土壤后取样，多杀菌素处理作为处理组，分别置于土壤、后取样。获得了个表达量变化倍以上的差异蛋白点，成功鉴定了个蛋白点，其中上调蛋白点