基于内质网应激信号通路研究肾衰康灌肠液减轻HK-2细胞缺氧_复氧损伤模型的分子机制

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1、学位论文基于内质网应激信号通路研究肾衰康灌肠液减轻HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型的分子机制Basedonendoplasmicreticulumstresssignalingpathwaytoanalyzethemolecularmechanismofhypoxia/reoxygenationinjurymodelofHK-2cellsinducedbyShenShuaiKangenema吴新萍指导教师姓名：李明权教授申请学位级别：硕士专业名称：中西医结合肾病方向论文提交时间：2018年6月论文答辩时间：2018年5月二○一八年五月成都中医药大学硕士研究生学

2、位论文中文摘要目的基于内质网应激信号通路研究肾衰康灌肠液减轻HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型的分子机制。方法取新西兰大白兔6只，空白组不予以实验处理，PBS组予以PBS液灌肠，肾衰康灌肠液组予以肾衰康灌肠液灌肠，分别予以灌肠后采取血清培养经缺氧/复氧造模的HK-2细胞。PBS血清培养组加入PBS血清，低剂量血清培养组加入低剂量组含药血清（肾衰康灌肠液组血清25%+空白对照组血清75%）、中剂量血清培养组加入中剂量组含药血清（含肾衰康灌肠液组血清50%+空白组对照血清50%）、高剂量血清培养组加入高剂量含药血清（含肾衰康灌肠液组血清100%）。采用CFSF/PI

3、染色实验、流式细胞法检测各组细胞凋亡的变化，RT-PCR实验检测各组CHOP以及GRP78各mRNA表达量，Westernblot法检测各组CHOP蛋白、Caspase-12蛋白、GRP78蛋白表达量的变化。结果1.根据CFSE/PI染色结果显示,4h时各组HK-2细胞凋亡增加，表明缺血再灌注损伤模型建立成功，12h时结果表明，肾衰康灌肠液含药血清对HK-2细胞凋亡有一定的抑制效果，高剂量组药效最佳。2.运用AnnexinV/PI染色法检测各组细胞凋亡率的影响。造模后0小时，各组细胞凋亡率均处于较低水平，4h-12h时,四组HK-2细胞凋亡率明显增加。4h、

4、12h数据显示，高剂量、中剂量、低剂量灌肠液含药血清培养的HK-2细胞缺氧/复氧损伤组的凋亡率明显低于PBS组（P<0.05），中剂量含药血清培养组对细胞凋亡的抑制最为明显（P<0.01）。说明肾衰康灌肠液具有抑制HK-2细胞凋亡的作用。3.采用RT-PCR实验检测各组CHOP以及GRP78各mRNA表达量。数据显示，在0h-24h，GRP78及CHOPmRNA均出现表达。在4h、8h三组含肾衰康灌肠液的血清组的GPR78mRNA表达量均低于PBS组（P<0.05），12h高剂量组GRP78mRNA表达量低于PBS组（P<0.05）。4h时，中剂量组与高剂量

5、组CHOPmRNA表达量与PBS组相比明显下降（P<0.05）。12h时中剂量组CHOP基因的表达量高于PBS组（P<0.05），表明该模型诱发了内质网应激，肾衰康灌肠液对内质网标志性分子GRP78mRNA、CHOPmRNA的表达量产生了影响。1成都中医药大学硕士研究生学位论文4.用Westernblot法检测各组CHOP、GRP78、Caspase-12蛋白表达量。8h时，三组含肾衰康灌肠液的血清组Caspase-12蛋白、CHOP蛋白的表达量明显低于PBS组，而其他时间的表达量与PBS组之间无明显变化。三组含肾衰康灌肠液的血清组GRP78蛋白的表达量与P

6、BS组相当。结论肾衰康灌肠液作用的分子机制可能是通过抑制模型中8h时CHOP、Caspase-12上调，从而抑制内质网应激反应减轻HK-2细胞凋亡。关键词:内质网应激；肾衰康灌肠液；肾缺血再灌注损伤；Caspase-12；急性肾损伤；GRP78；含药血清；CHOP；2成都中医药大学硕士研究生学位论文AbstractObjectives:Basedonendoplasmicreticulumstresssignalingpathwaytoanalyzethemolecularmechanismofhypoxia/reoxygenationdamagemodel

7、ofHK-2cellsinducedbyShenShuaiKangenema.Methods:SixwhiterabbitsofNewZealandwererandomlydividedinto3groups(2ratsineachgroup),whichweredividedintoblankgroup,PBSgroupandShenShuaiKangenemagroup.Thenormalfeedingoftheblankgroupwasnottreatedwithexperimentaltreatment.PBSgroupwastreatedwithP

8、BS,andShenShuaiKangenemagr