健脾泻火法调控脾胃伏火证RAU患者口腔免疫及菌群失调的机制研究

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1、成都中医药大学ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine二0一八届博士研究生学位论文健脾泻火法调控脾胃伏火证RAU患者口腔免疫及菌群失调的机制研究StudyonregulatoryfunctionoffortifyingspleenandpurgingfiremethodinoralimmunizationandfloraimbalanceinRAUpatientsoflatentfireinthespleenandstomach研究生姓名：陈杰指导教师姓名：丁维俊教授学科专业名称：方剂学二〇一八年五月学位论文健脾泻火法调控脾胃伏

2、火证RAU患者口腔免疫及菌群失调的机制研究StudyonregulatoryfunctionoffortifyingspleenandpurgingfiremethodinoralimmunizationandfloraimbalanceinRAUpatientsoflatentfireinthespleenandstomach陈杰指导教师姓名：丁维俊教授申请学位级别：博士学位专业名称：方剂学论文提交时间：2018年3月论文答辩时间：2018年5月二〇一八年五月成都中医药大学博士学位论文中文摘要目的揭示脾胃伏火证复发性阿弗他溃疡（recurrentaphthousulcer,R

3、AU）患者口腔菌群失调与免疫功能低下的病理特征，为从微生态角度探索中医证型的微观指标提供参考；阐明健脾泻火法的经典方-泻黄散基于调控口腔菌群、激活口腔粘膜免疫等途径，达成临床疗效的分子生物学机制；为促进中医相关病证基础研究与临床应用提供一些新的科学依据。方法：第一部分：健脾泻火法治疗脾胃伏火证RAU的临床疗效观察。纳入符合脾胃伏火证RAU诊断标准的62例患者，以健脾泻火法为基本治法，采用口服加味泻黄散治疗，疗程5天。比较患者治疗前后在主证评分、次证评分、总评分、远期发病率等方面的变化，以评价健脾泻火法治疗脾胃伏火证RAU的临床疗效。第二部分：健脾泻火法调节脾胃伏火证RAU患者免

4、疫紊乱的实验研究。基于第一部分临床治疗结果，选取疗效前30名患者，采集其治疗前后的唾液样本；同时，采集30名健康志愿者唾液样本，总共90份样本纳入研究。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测所有唾液样本中sIgA、Lys、hBD-2、TNF-α的含量。比较脾胃伏火证RAU患者与健康正常人上述免疫指标的差异，以及治疗前后的变化，观察健脾泻火法对脾胃伏火证RAU患者免疫失调状态的调节作用。第三部分：健脾泻火法调节脾胃伏火证RAU患者口腔菌群失调的研究。采用16SrRNA基因测序平台，分析正常组、患者组、治疗组口腔菌群在不同层次（门、纲、目、科、属、种）物种相对丰度、物种分类树、样品复

5、杂度、样品多样性等方面的差异。通过宏基因组测序分析，观察各组口腔菌群的重要功能基因表达状况，分析物种类别、丰度，相关功能注释等指标变化特征。以分析健脾泻火法对脾胃伏火证RAU患者口腔菌群失衡的调节作用。结果：（1）62例脾胃伏火证RAU患者经加味泻黄散治疗一个疗程后，溃疡个数、溃疡大小、周围组织充血、溃疡渗出、溃疡疼痛等局部症状（主症）均较治疗前1成都中医药大学博士学位论文有显著改善（P＜0.05）；口热口臭、口干口渴、尿黄、便干等全身症状（次症）也较治疗前有显著变化（P＜0.05）；症状改善的总有效率为92.3%；3月复发率治疗前为96.64%，治疗后为71.43%，说明远期

6、复发时间（3月复发率）同个体比较有所延长。治疗过程中未发现任何不良反应和副作用。（2）脾胃伏火证RAU患者组唾液中sIg-A、Lys、hBD-2的含量均较正常组明显降低，TNF-α含量较正常组升高，其差异均具有显著性（P<0.01），说明脾胃伏火证RAU患者存在局部及全身免疫功能紊乱。经加味泻黄散治疗后，治疗组sIg-A、Lys、hBD-2的含量较患者组明显回升，差异具有显著性（P<0.01）；TNF-α含量在治疗组有所减低，但降低程度有限，与患者组比较差异不具有显著性（P>0.05）；与正常组比较仍存在较显著差异（P<0.01）。说明健脾泻火法部分纠正了脾胃伏火证RAU患者机

7、体免疫功能紊乱的状态，是其治疗RAU的有效机制之一。同时显示出RAU患者在溃疡间歇期免疫功能紊乱并未完全得到纠正，还存在持续性炎性免疫功能失调，这可能就是导致其反复发作的因素之一。（3）脾胃伏火证RAU患者组口腔菌群物种构成的丰度与正常组比较，有较明显的差异。在门水平，以厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门、梭杆菌门、螺旋体的变化最为明显。其中，变形菌门、螺旋体高于正常组，厚壁菌门、拟杆菌门、梭杆菌门低于正常组。在属水平，链球菌属、普雷沃菌属、拟杆菌属、梭杆菌属、韦荣菌属均较正常组降低，而嗜血杆菌属