基于m1m2型mφ极化及炎症调控效应探索黄连解毒汤干预as的作用与机制

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1、学校代码：学号：湖南中医药大学博士学位论文基于型极化及炎症调控效应探索黄连解毒汤干预的作用与机制科专业中西医结合临床研究方向脑血管病的中西医结合防治研究作者姓名田维毅导师姓名、职称葛金文教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位学位、证书而使用过的材料。与我共同对本研究所作过重要贡献的单位及个人均已在论文中作了明确说明并致谢。作者签名：闼年月日关于学位论文使用

2、授权的说明本人完全了解湖南中医药大学有关收集、保留及使用学位论文的规定。即：学校可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；可以公布学位论文的全部或部分内容，允许学位论文被查阅和借阅；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文或通过国内有关权威机构收录论文全文，向社会提供信息服务。保密论文在解密后守此规定）年月曰摘要目的：动脉粥样硬化（是多种心脑血管疾病的共同病理基础，与急性心脑血管事件的发生密切相关，严重危害人体生命健康。本文通过体内外实验，探索清热解毒代表方黄连解毒汤基于型巨噬细胞（极性分化（极化）及炎症调控效应干预的作用与部分机制，为完善中医药基于炎症反应认识的“邪毒

3、”理论积累科学依据，为进一步研究黄连解毒汤等清热解毒中药基于炎症调控效应防治的作用与机制提供实验基础。方法：体内实验：采用家兔制备模型，从周开始分别以黄连解毒汤水煎剂大、中、小剂量灌胃干预，在造模第、、周结束时，收集模型动物血清检测的重要驱动因素血脂、最具代表性的炎症标记物反应蛋白（和型各自具有代表性的炎症因子的主要诱导因子与活性产物）的主要诱导因子与活性产物）的动态变化及黄连解毒汤的影响。在第周实验结束时，采集模型家兔主动脉壁组织，检测黄连解毒汤对实验动物组织病理变化和损伤局部分布状况的影响。体外实验：细胞与含药血清的制备：采用诱导培养小鼠骨髓源，流式细胞术鉴定细胞纯度；釆

4、用诱导培养巨噬细胞源泡沫细胞，油红染色鉴定诱导效果；采用小鼠制备不同剂量黄连解毒汤含药血清，法筛选其对及其泡沫细胞数量无明显影响的加样浓度。检测黄连解毒汤含药血清对及其泡沫细胞极化和释放炎症因子的影响：（流式细胞术检测含药血清对及其泡沫细胞极化的影响；（法检测含药血清对及其泡沫细胞释放和的影响。检测与炎症调控密切相关的信号通路表达：（法检测黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞和的表达水平的影响；（检测黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞和蛋白表达水平的影响。结果：体内实验：血清检测：（血脂：在形成过程中，模型家兔血、、总体呈上升趋势（戶或尸或尸，各剂量黄连解毒汤对此无显著千预作用（血在前期（

5、周前）上升（尸、后期（周）平稳（尸〉各剂量黄连解毒汤能持续提升模型动物血水平（尸或尸。（：在形成过程中，模型家兔血总体呈大幅度上升趋势（或〈，不同剂量黄连解毒汤能持续抑制模型动物血水平（尸或尸或尸。（：在形成过程中，模型家兔血总体呈大幅度上升趋势（尸，不同剂量黄连解毒汤对实验动物血具有显著抑制作用（或或尸。（在形成过程中，模型家兔血总体呈下降趋势尸，不同剂量黄连解毒汤对实验动物血具有显著提升作用或戶或尸在周左右尤其明显。组织检测：（肉眼与镜下病理检查显示：在第周时，模型家兔粥样硬化损伤明显，大、中剂量黄连解毒汤对进程和损害程度具有明显缓解作用；（免疫组化检测结果显示：在第周模

6、型对照组动物的粥样斑块中，细胞主要分布在斑块中心区，细胞主要分布在斑块边缘；大剂量给药组细胞的分布扩展到整个斑块，细胞明显减少；中、小剂量给药组细胞的分布较模型对照组广泛。体外实验：细胞与含药血清：诱导小鼠骨髓源纯度高达，诱导培养巨噬细胞源泡沫细胞形态典型，可作为本实验研宄用细胞；法检测显示，含药血清在终浓度为以内时对实验细胞数量无明显影响。黄连解毒汤含药血清对及其泡沫细胞极化和释放炎症因子的影响：（对及其泡沫细胞极化的干预作用：在不同剂量黄连解毒汤含药血清干预下，巨噬细胞分子阳性比例（、、与正常对照组血清接近，而分子阳性比例、、最高的大剂量干预组（是正常对照组血清（的倍；巨

7、噬细胞源泡沫细胞分子阳性比例、、与正常对照组血清比较呈双向波动（但下降趋势更为明显），分子阳性比例（、、与正常对照组血清（比较也呈双向波动（但上升趋势更为明显）。对及其泡沫细胞释放和的影响：与正常对照组血清比较，—定剂量含药血清能促进分泌和，但对后者的作用更为明显；与正常对照组血清比较，一定剂量含药血清能抑制巨噬细胞源泡沫细胞释放、促进巨噬细胞源泡沬细胞释放或。黄连解毒汤含药血清对炎症相关信号通路表达的影响：与正常对照组血清比较不同剂量的含药血清对巨噬细胞和的及其蛋白表达量表现出不同程度的抑制作用（或尸