A型肉毒毒素与受体FGFR3关系研究

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1、分类号：单位代码：１０１４０４０３１５３１８５０密级：公开学号：？ＬＩＡＯＮＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文ＴＨＥＳＩＳＦＯＲＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＡ型肉毒毒素与受体ＦＧＦＲ３关系研究中文题目：ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｏｆＢｏｔｕｌｉｎｕｍｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｔｙｐｅＡｐａｎｄＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｃｅｔｏｒ３英文题目：ｐ论文作者：邱语进万冬梅教授指导教师：动物学专业

2、：完成时二○一八年四月间：辽宁大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：殊进年ｔ月泌日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同

3、意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权辽宁大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索￥可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》并通过网络向社会公众提供信息服务。学校须按照授权对学位论文进行管理，不得超越授权对学位论文进行任意处理。（）。（保密，在保密：请在括

4、号内划＿年后解密适用本授权书”，，）授权人签名：法进指导教师签名：曰期：年「月冷日日期：年＾月从日申请辽宁大学硕士学位论文A型肉毒毒素与受体FGFR3关系研究ResearchontherelationshipofBotulinumneurotoxintypeAandFibroblastGrowthFactorReceptor3作者：邱语进指导教师：万冬梅教授专业：动物学答辩日期：2017年5月18日二○一八年五月·中国辽宁摘要摘要肉毒毒素（Botulinumneurotoxin,B

5、oNT）是由肉毒梭状芽孢杆菌产生的一种蛋白类神经毒素，通过阻断神经-肌肉突触的传递进而引发松弛性的肌肉麻痹导致个体中毒。肉毒毒素可分为7种血清型（A－G），其中A、B、E和F型能引起人类肉毒中毒，A型毒性最强且最为常见。按肉毒毒素的“双受体学说”，BoNT/A有两种受体—小分子神经节苷脂GT1b和突触囊泡蛋白SV2C。目前关于BoNT/A与这两个受体的结合位点已经明确。2013年Brigitte等研究发现成纤维生长因子受体3（FibroblastGrowthFactorReceptor3,FGFR3）是

6、BoNT/A新近发现的受体，其与毒素结合后会引发毒素内吞，但关于该受体与BoNT/A结合的确切位点以及在肉毒中毒中所起的作用以及与其它两种受体间的相互关系尚不清楚。本课题通过截短、肽库分析、分子对接、序列比对、构建突变体及动物实验等手段研究了受体FGFR3在BoNT/A上的结合位点、不同亚型BoNT/A毒力差异的原因以及3种受体（GT1b、SV2C、FGFR3）之间的关系，从而为阐明肉毒中毒机制、肉毒毒素疫苗及中和抗体研发奠定理论基础。分别表达纯化了受体FGFR3与受体结合区BoNT/A重链C端（BoN

7、T/AHc）并制备了供空间结构解析的复合物晶体；表达纯化了截短片段BoNT/AHCN和HCC，通过间接酶联免疫吸附测定方法（ELISA）确定FGFR3与BoNT/A结合位点位于HCN区。合成了由46条15肽组成的BoNT/AHCN肽库，通过间接ELISA分析发现第20、21、37号小肽与FGFR3结合能力较强，其中37号小肽结合能力最强。通过ThePyMOLMolecularGraphicsSystem软件对这3个肽的空间位置分析发现20、21、37号小肽在空间上临近并形成一个凹面。基于肽库筛选结果利用

8、分子对接软件DiscoveryStudio对BoNT/A与受体FGFR3可能的结合位点进行预测，得到2个经验函数评分较高的模型Pose14、Pose155，分别选用Pose14中的1061R与Pose155中的970N进行突变验证，结果显示模型Pose14个更为可靠，推测FGFR3与配体BoNT/AHC上的Ser902、Thr963、Asn966、Asn971、Glu982、Gln988、Asp1058、Gly1059、Arg1061氨基酸