六味地黄汤水提醇溶部位对2型糖尿病模型大鼠肝脏pi3kakt信号通路的影响

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1、分类号：学校代码：密级：学号：湖南中医药大学硕士学位论文六味地黄汤水提醇溶部位对型糖尿病模型大鼠肝脏信号通路的影响学科专业：中药学研究方向：临床中药学作者姓名：导师姓名及职称：戴冰教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：

2、良―氣扣年月护关于学位论文使用授权说明本人了解湖南中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以釆用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。中文摘要目的建立六味地黄汤水提醇溶部位的高效液相分离方法，并测定其中四种苷类成分的含量；观察六味地黄汤水提醇溶部位对型糖尿病模型大鼠肝脏磷脂酸肌醇磷酸激酶蛋白激酶信号通路中胰岛素受体底物、磷脂酰肌醇激酶（、蛋白激酶信号因子表达的影响，从基因和蛋白水平探讨六味地黄

3、汤水提醇溶部位干预型糖尿病的机制，从而阐明该方干预型糖尿病胰岛素抵抗（的药效物质基础及作用机制。旅釆用法对六味地黄汤水提醇溶部位进行分离并测定其中四种苷类成分莫诺音、猜牙菜苷、苟药苷和马钱苷的含量。选用色谱柱，以甲醇水（为流动相；检测波长为；流速为柱温为°。釆用高糖、高脂饲料喂养周后，再行腹腔注射小剂量链脲佐菌素（且空腹血糖彡的大鼠建立型糖尿病动物模型，将其随机分为空白组、模型组、罗格列酮组和六味地黄汤水提醇溶部位组，模型组和空白组给予等量蒸馏水，给药后，测各组大鼠空腹血糖（、空腹胰岛素（取各组模型大鼠新鲜肝组织，釆用实时荧光

4、定量法测定各组大鼠肝脏组织、、的表达情况；免疫蛋白印迹法（测定各组大鼠肝脏中、、总蛋白及碟酸化蛋白的表达情况。结果、莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷浓度分别在，，，范围内线性关系良好。平均回收率分别为，，，，分别为，。六味地黄汤水提醇溶部位中莫诺苷、障牙菜苷、芍药苷和马钱苷的平均含量以醇溶部分量计算分别为按生药量计算分别为，。、与模型组比较，六味地黄汤水提醇溶部位组大鼠空腹血糖、血清胰岛素水平明显下降（。3、与模型组比较，六味地黄汤水提醇溶部位组肝脏、、的表达量明显上升。（代、与模型组比较，六味地黄汤水提醇溶部位组肝组织中、、

5、总蛋白及磷酸化蛋白表达均增加。（结论高效液相色谱法测定六味地黄汤水提醇溶部位中莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷含量的方法，稳定性和重复性较好。可用于六味地黄汤水提醇溶部位中苷类成分的质量控制。六味地黄汤水提醇溶部位有降血糖、改善的作用，其作用机制可能是通过上调胰岛素抵抗大鼠肝脏组织信号通路中关键基因、、的表达，促进肝脏组织胰岛素信号传递的恢复，干预从而改善。其可能是六味地黄方改善，调节信号通路信号转导的药效物质基础之一。该部位中的苷类成分莫诺苷、猜牙菜苷、芍药苷和马钱苷可能为六味地黄方干预、调节信号通路的主要药效成分之一。纖词

6、六味地黄汤水提醇溶部位；型糖尿病；胰岛素抵抗；信号通路；AbstractObjectiveToestablishahighperformanceliquidchromatographymethodfortheseparationofLiuweidihuangdecoctionwaterextract-alcoholsolubleparts,andusethismethodforthedeterminationoffourglycosidesinit;ToobservedtheeffectofIRS2、、，，，，，，、、、，、、

7、，，，，and1.80%，，，、、、、、、，、！，、，中英文缩略词对照表缩略词英文全称中文全称高效液相色谱型糖尿病胰岛素抵抗族岛素受体底物磷酸化胰岛素受体底物磷脂酰肌醇激酶磷酸化磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶磷酸化酪氨酸蛋白激酶空腹血糖空腹胰岛素实时荧光定量游离脂肪酸甘油醛磷酸脱氢酶目录引第一部分六味地黄汤水提醇溶部位的制备及其苷类成分的含量测定材料主要试剂主要仪器实验方法六味地黄汤水提醇溶部位的制备色谱条件对照品溶液的制备供试品溶液的制备観六味地黄汤水提醇溶部位的干浸膏得率方法学考察碰第二部分六味地黄汤水提醇溶部位对型糖尿病模型大鼠

8、胰岛素抵抗及肝脏组织中信号通路的影响实验材料和仪器实验动物实验药物实验试剂主要仪器设备桃六味地黄汤水提醇溶部位的制备建立型糖尿病大鼠模型分组给药取材法测大鼠空腹血清胰岛素水平2.6Real-time荧光定量法检测肝组织、妇、免疫印迹法测定肝组织、、总蛋白及磷酸化蛋白表达量：统