不同年龄阶段山羊瘤胃古菌，细菌菌群结构组成研究

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5、育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧生签名；月巧关于论文使用授枚的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学巧有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅巧借、，可汇编学位论文。同意四川农业阅！＾采巧影印、缩印或扫描等复制手段保存大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：月曰导师签备嵐年屋月叫日词衣綠摘要瘤胃微生物在维持反自动物的健康和提高饲料利用效率方面起着重要的

6、作用而且微生物菌群结构会随着年龄的变化而发生改变。但是现阶段关于瘤胃微生物随年龄发展变化的研究鲜见报道。为此，本实验Ｗ山羊为实验动物，提取瘤胃液总ＤＮＡ，并利用高通量技术进行测序，旨在硏究不同年龄阶段山羊瘤胃古菌，细菌菌群结构姐成。分别挑选１天、７天、１５天、１月、２月、３月、４月、５月、６月龄、１岁、１．５岁和２岁十二个年龄组共６０头健康的山羊作为实验动物，其中１天与２岁年龄组仅用于古菌菌群结构的研究，而其他年龄组用于研究古菌和细菌菌群结构。５一每个年齡组，所有动物按正常饲养管理程序祠养日龄屠宰采样外，头羊。除其余年龄沮在清晨饲喂后１小时

7、用胃管经食道插入瘤胃，利用真空累压力装置吸取瘤胃内容物，抽取大于５０ｍｌ的瘤胃内容物，经四层灭菌纱布过滤得瘤胃液，提取瘤胃液微生物总ＤＮＡ５１５Ｆ／８０６Ｒ，采用原核生物通用引物对针对细菌１化ｒＲＮＡ－－ＰＣ民扩增的Ｖ４Ｖ５可变区进行Ｂａｒｃｏｄｅ，采用古菌特异性引物对３４９Ｆ／８０６民针对化ｒＲＮＡＶ３－Ｖ４可Ｂａｒｃｏｄｅ－ＰＣ民古菌扩增，１的变区进行产物经检测后送千年基因生物技术公司用Ｍ设巧测序平台进行高通量测序。后期数据分析主要用ＱＩＩＭＥＬ８．０软件进行分析，数据的差异