rhd阴性个体遗传多态性与抗-d同种免疫关系研究

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1、12目录缩略词表…………………………………………2中文摘要…………………………………………3英文摘要…………………………………………5前言………………………………………………7材料与方法………………………………………9结果………………………………………………17讨论………………………………………………22结论………………………………………………26参考文献…………………………………………27附录………………………………………………31综述………………………………………………37在校期间发表的学术论文………………………46个人简历…………………………………………50

2、致谢………………………………………………513缩略词表英文缩写英文全称中文全称ulmicrolitre微升mlmillilitre毫升IgGimmunoglobulinG免疫球蛋白GIgMimmunoglobulinM免疫球蛋白MIgAimmunoglobulinA免疫球蛋白AIgEimmunoglobulinE免疫球蛋白EICinternalcontrol内对照NCnegativecalibrator阴性校正品PCpositivecalibrator阳性校正品AgAntigen抗原AbAntibody抗体minminute分钟DNAdeoxyribonuclei

3、cacid脱氧核糖核酸RNARibonucleicacid核糖核酸PCRpolymerasechain聚合酶链式反应reactionPCR-SSPpolymerasechain聚合酶链式-序列特异性reactionwithsequence-引物spepicificprimersEBethidiumbromide溴化乙锭rpmrevolutionperminute每分钟转速ggram克HDNhemolyticdiseaseofthe新生儿溶血病newbornDATdirectantiglobulintest直接抗人球蛋白试验IATindirectantiglobul

4、intest间接抗人球蛋白试验4RhD阴性个体遗传多态性与抗-D同种免疫关系研究中文摘要目的通过对血清学试验确认RhD阴性个体的RHD基因型检测，研究不同类型遗传学背景RhD阴性个体与抗-D同种免疫的关系。重点探讨各种RhD变异型个体的献血及输血策略，为稀有血液的合理应用提供理论依据。方法1、对2011年3月至2013年6月医院送检的Rh阴性个体，通过询问输血史和妊娠史排除没有免疫史的个体。采用盐水试管法和间接抗人球试验（IAT）排除血清学试验常规试验阳性的个体。对孕妇的流产史及生育史进行分类，研究流产史及生育史对抗-D产生的影响。2、采用微柱凝胶法筛查抗体，并通

5、过谱细胞进行抗体鉴定，确认抗体特异性。检测这些样本的Rh表型，包括D、C、c、E和e抗原。3、采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）技术及DNA序列分析技术，分析样本的RHD基因。人类红细胞RHD阴性鉴定基因检测试剂盒可检测的基因型包括RhD阳性、RhD阴性、RhD-CE(2-9)-D、DVa(Hus)、DVIIII型、弱D15型和DELRHD1227A。结果1、本研究观察有免疫史RhD阴性个体共计336例。其中22例有输血史的个体均为医院在输血前检查时发现抗体筛选阳性的送检标本样本，对其进行抗体鉴定试验确定抗体特异性均为抗-D。通过询问病史患者都是以往输用过

6、RhD阳性血液或不能明确所输用血液具体种类的个体。314例有过既往妊娠史的Rh阴性孕妇中产生抗-D46例，其中G2P0孕妇96例，产生抗-D个体4例，阳性率4.2%；G2P1孕妇41例，产生抗-D个体6例，阳性率14.6%；G3P0孕妇125例，产生抗-D个体10例，阳性率8.0%；G3P1孕妇38例，产生抗-D个体14例，阳性率36.8%；妊娠超过三次的孕妇38例，产生抗-D个体14例，阳性率36.8%。2、通过DiaClonRh-Subgroups+k卡测得对336例IAT阴性标本进行Rh表型鉴定。Ccee的个体为185例（55.06%），Ccee个体119例

7、（35.42%），CCee个体14例（4.17%），ccEe个体11例（3.27%），CcEe个体7例（2.08%）。3、通过DiaClonRh-Subgroups+k卡测得68例产生抗-D的RhD阴性个体中，Rh表型为ccee的个体为56例（82.3%），Ccee个体5例（7.4%），CCee个体4例（5.9%），ccEe个体2例（2.9%），CcEe个体1例（1.5%）。其中表型为ccee5的个体产生抗-D的比例最高，达82.3%。4、通过人类红细胞RHD阴性鉴定基因检测试剂盒对336份样品进行检测，发现其中249例（74.1%）个体完全缺失RHD基因，l68

8、例（20.