rack1蛋白对ibdv vp5蛋白与宿主vdac2蛋白相互作用诱导细胞凋亡的影响

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1、分类兮：单位代码：密级：公开学号：博士学位论文蛋白对蛋白与宿主蛋白相互作用诱导细胞凋亡的影响研究生：蔺文成指导教师：郑世军教授申请学位门类级别：农学博士专业名称：预防兽医学研究方向：动物分子病毒学与免疫学所在学院：动物医学院二零一五年五月Ph.D.DissertationTheeffectsofRACK1onapoptosisinducedbyinteractionofIBDVVP5withVDAC2inhostcellsPh.D.Candidate:WenchengLinSupervisor:ProfessorShijunZhen

2、gMajor:PreventiveVeterinaryMedicineResearchField:AnimalMolecularVirology&ImmunologyChinaAgriculturalUniversityMay,2015本研究由国家蛋鸡产业技术体系项目编号：以及国家自然科学基金项目项目编号：和资助独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构

3、的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：年月丨日摘

4、要鸡传染性法氏囊病（是由鸡传染性法氏囊病病毒（引起的一种急性、高度传染性的免疫抑制性疾病。感染的靶器官是鸡的法氏囊，感染后会诱导淋巴细胞发生凋亡，造成法氏囊组织的损伤。本实验室前期研究发现的非结构蛋白通过与电压依赖性阴离子通道相互作用引起鸡成纤维细胞（的凋亡并促进病毒的释放，但其内在机制并不清楚。本研究利用酵母双杂交、免疫共沉淀和激光共聚焦显微镜等实验方法寻找与相互作用诱导细胞凋亡的信号传导分子，解析诱导细胞凋亡的信号传导过程，为揭示引起细胞凋亡的分子机理提供依据。本研究以作为“诱饵”蛋白，利用酵母双杂交方法在鸡法氏囊组织文库中筛选

5、到与相互作用的蛋白：激活的蛋白激酶受体（通过半乳糖苷酶活性分析验证了二者在酵母内的相互作用；免疫共沉淀实验发现能与和发生相互作用和分别特异性地结合在的两端进一步研究发现、和蛋白能在细胞内形成复合物；激光共聚焦显微镜实验证实能与和共定位于线粒体上。随后研究发现，在细胞和鸡胚成纤维细胞（，中过表达蛋白能显著抑制感染引起的细胞凋亡，在细胞中，过表达蛋白能显著促进细胞沉淀中的增殖，在细胞培养上清中病毒载量没有发生明显变化，而在细胞中过表达蛋白，无论是上清还是沉淀，病毒的载量都显著提高，表明过表达蛋白能促进的增殖。利用方法沉默细胞中内源性蛋白

6、的表达，发现蛋白沉默表达的细胞出现了凋亡现象并显著抑制了病毒的增殖，进一步研究发现蛋白沉默表达诱导的凋亡与和的活化有关。综上所述，本研究发现和能在病毒感染细胞内形成复合物，能抑制诱导的细胞凋亡的发生，促进病毒的增殖，在感染过程中发挥抑制凋亡的作用，为深入了解的致病机制提供了重要参考依据。关键词：蛋白，蛋白，蛋白，细胞凋亡，病毒增殖AbstractInfectiousbursaldisease(IBD)isanacute,highlycontagious,andimmunosuppressiveaviandiseaseinyoungc

7、hickensthatoccursacrosstheworld.ItscausativeagentIBDvirus(IBDV)destroysitstargetcells,theB-lymphocyteprecursors.IBDVinfectionmaycausemortalityinnaivechickensandveryhighmortalityinchickenswithlowlevelsofneutralizingantibodiesornomortalityatallbutahighdegreeofimmunosuppr

8、ession.Thesurvivalchickenssuferfromasevereimmunosuppressionwhichleadstoanincreasedsusceptibilitytootherpathogens.Ourp