qx型传染性支气管炎病毒疫苗株鸡胚传代致弱分子机制的初步研究

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2、？－ＱＸ塑传染性支气管炎病毒疫苗株鸡胚传代致弱分子机制的初步研究－’—，户矣、冷苗八二■窒本三苗里：Ｃ：、＇．＇八－＇瓜方勺，皆＾！乂．皆；分：＜专译．＊＇、ｄ＇＇？，？一一＊—Ｃ－《６Ｓ－於指导教师姓名＊：吴艳涛教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９－张小荣副教授，扬州大学．江苏扬州，２２５００９＾＼＼，＇＇＾申请学位级别：预防兽医学：硕壬学科专业名称１；－：论文提交日期：２０１５年６月论文答辩日期２０１５年６月２曰—学位授予单位：２０１５年６：扬州大学学位授

3、予日期月３０日Ｔ＾答辩委员会主席：戴亚斌研究员―去＂苗寺寺心．４續？．却．寸韓戊．心过ＶＰ一．．’＂＇三’－心．？．。．一义‘每．＇一＾＇？．六－：＾今－．．？？…？’一心、－，－－－‘‘？成义＾、一，泌之＇一＊、■Ｗ一：＾－ｒｒ＾象＂、慕＇瓣ｒ：禅巧Ｖ擧沁朵秦磯橋雜读去裏代珊＝ＱＸ型传染性支气管炎病毒疫苗株鸡胚传代致弱分子机制的初步研究１ＱＸ型传染性支气管炎病毒疫苗株鸡胚传代致弱分子机制的初步研究摘要传染性支气管炎脚ｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ扭是由传染性

4、支气管炎病毒脚ｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，）ｖｉｒｕｓ，扭Ｖ）引起的急性、髙度接触性传染病。由于曲Ｖ的易变性，不同地区、不同时期流行的ＩＢＶ毒株差异很大。自１９９６年型旧￥在我国首次分离＾＾，ＱＸ１来即表现出较强的传，播能力，在许多国家和地区流行目前己成为我国曲Ｖ流行株的优势基因型。由于不同类型化Ｖ毒株之间只有部分或完全没有交叉保护作用，而我国目前广泛使用的Ｍａｓｓ型疫苗与ＱＸ型毒株亲缘关系较远，运就导致疫苗免疫失败的情况时常发生，给养殖业带来巨大一的经济损失。因此，研制与当前流行毒株抗原性致的疫苗对于旧的防

5、控显得尤为重要。本实验室前期曾对ＱＸ型曲ＶＣＫ／ＣＨ／ＪＳ／２０１０／１２株进行了鸡胚连续传代致弱，并获得了免疫原性好、遗传性状稳定的弱毒疫苗株（ＱＸＬ株）。在临床试验中，ＱＸＬ株的安全性和免疫保护效果良好。本研巧对ＱＸＬ株的第５代、第４０代、第６０代、第８０代和第１００代毒－－－５－、－株（ＱＸＬ、ＱＸＬ４０、ＱＸＬ６０、ＱＸＬ８０ＱＸＬ１００）进行了全基因测序，并构建了ＱＸＬ５毒株的反向遗传系统，为了解ＱＸ型旧Ｖ／ＣＨ／ＪＳ／２０１０／１２ＣＫ株鸡胚传代致弱的分子机制提供了依据。１．不同代次化ＶＣＫ／ＣＨ

6、７於／２０１０／１２株的全基因序列测定与分析－－５、－、、、对ＩＢＶ（ＰＧＬ、ＱＸＬ４０（ｐａ６０＜ｐａ８０ＱＸＬＩＯＯ的全基因进行分段克隆测序，并通过生物学软件对各片段比对、拼接，获得各代次毒株的全基因序列。结果显示，ＱＸＬ’’－－－－－－ＵＴ－ａ－化－３ｂ－－ＯＲＦＸ５ａ５ｂ－Ｎ－株基因组结构为５ＲｌＳ３ａＭＵＴＲ３。其中ＱＸＬ５和ＱＸＬ４０全一－长为２７６８１ｂ，ＱＸＬ６０、（ｐａ８０和ＱＸＬＩＯＯ全长为２７６８２ｂ，其基因组在ＯＲＦＸ处多出个ｐｐ碱基Ａ。对各代次毒株的全基因序列分析发现，ＱＸＬ４０、ＱＸＬ６０基因序

7、列变化较大，分－别占碱基总变化数的２８．２１％和６６．６７％，而ＱＸＬ８０、ＱＸＬＩＯＯ基因序列与ＱＸＬ６０相比，变一致化很少，趋于稳定。与前期动物试验结果保持。在传代过程中，ＱＸＬ４０有４４个碱基发生变化，并引起２３个氨基酸变化６０在此基础上又有１０８个碱基发生变化，并引起３１；ＱＸＬ个氨基酸变化；ＱＸＬ８０在前面１４８处变化的基础上又有２个碱基发生变化，引起２个氨基酸－６。变化；ＱＸＬ１００在前面１５０处变化的基础上又有个碱基发生变化，并引起３个氨基酸变化送些突变的氨基酸分散地存在于基因组的不同区域，其中ｎｓｐ２变化

8、最大，ｎｓｐ３和Ｓ基因也发２扬州大学硕±学位论文生了较大的变化。分析结果表明出Ｖ的毒力强弱可能不是由单个氨基酸的突变引起的，而是由多