mp1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究

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3、文中除特别加Ｗ标注和的地方外■不包含他人和其他机构己经撰写或发表巧的研究成果，其他同志的研充成果对本人的．．启示和所提供的帮助，均己在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：学位论文版权的使用授权书权保本学位论文作者完全了解迂宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有辽留并向国家有关部口或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权宁师范大学，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电芋文档的内容和纸质论文一的保密内容相致。的学位论文在解密后使用

4、本授权书。．学位论文作者签名：卖应片传指导教师签名：■签名日期：含年月日／＾辽宁师范大学硕士学位论文摘要辽宁绒山羊是我国特有的品种，并且是禁止基因外流的宝贵资源，其羊绒产量居全国首位，因此，研究与羊绒相关基因的功能就更具实际生产意义。前期，我们实验室通过建库、测通获得了辽宁绒山羊的新基因MP1（MEKPartner1）的全长序列，首先对MP1基因进行生物信息学分析，检测其核酸及氨基酸的同源性，建立进化树等。然后通过RT-PCR检测MP1基因在各组织中的表达，再利用qPCR方法检测其在毛囊生长的不同时期的初、次级毛囊中的表达含量，最后对绒山羊兴盛期皮肤进行原位杂交并对

5、其进行表达位点分析。为进一步研究MP1基因是否与羊绒细度之间存在某种关系，利用本实验室已有的Noggin基因RNA干扰的慢病毒，感染辽宁绒山羊皮肤细胞后，再利用qPCR检测其对MP1基因表达的影响，为培育出具有优良经济性状的绒山羊提供一定的分子理论基础。结果如下：（1）MP1基因编码的蛋白质包含124个氨基酸，分子量为13.64KD，是一个疏水性蛋白。MP1含有α螺旋结构（25.81%）、延伸链结构（33.87％）和无规卷曲（40.32％）。无跨膜结构域，无信号肽。MPl的氨基酸序列包含一个保守的MAPKKl-Int结构域，含有有3个可能成为磷酸化位点的Ser。RT-PCR检测结果显示

6、：仅在皮肤、心脏中MP1基因有表达，而在肝、肾、肺、脾中未发现其表达。qPCR检测毛囊在兴盛期时，MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的1.65倍，退行期MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的3.25倍。原位杂交分析发现：MP1在内根鞘上有明显的表达，在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中无表达。（2）成功构建出Noggin基因RNAi的慢病毒载体，Noggin基因被干扰后，qPCR检测发现MP1基因起负调控作用，MP1基因的相对表达量出现上调的趋势。由以上结果可以得出以下结论：（1）通过对MP1基因在生物信息学，荧光定量以及原位杂交等方面的研究，推测MP1对绒山羊皮肤细胞的生长发育产生影响

7、，可能与毛囊的生成及再上皮化过程有关，且并具有能够使羊毛变细的作用。（2）推测MP1基因可能存在于Noggin基因表达调控的下游，并通过其与Noggin基因之间存在的某种关系，实现BMP-MAPK途径共同作用来调节绒山羊的表皮及毛囊的的稳态和发育过程。关键词：辽宁绒山羊；MP1；荧光定量；原位杂交；RNAi；慢病毒IMP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究StudyontheexpressionofMP1inLiaoningCashmereGoat