mir-18a在电离辐射诱导结肠癌细胞死亡中作用的研究

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1、miR-18a在电离辐射诱导结肠癌细胞死亡中作用的研究StudiesontheRolesofmiR-18ainRadiation-InducedDeathinColorectalCancerCell作者姓名：燕蒙蒙专业名称：放射医学指导教师：马淑梅教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月29日中文摘要miR-18a在电离辐射诱导结肠癌细胞死亡中作用的研究结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，全世界每年约有一百万新增病例。肿瘤治疗方式包括手术、化疗、放疗、激素治疗等。其中放射治疗在肿瘤治疗中发挥着重要作用。但由于个体间存在差异，对放

2、疗的敏感性不同，所以治疗效果差强人意。因此，如何提高肿瘤的放射敏感性，成为当前结肠癌治疗的关键问题之一。miRNAs是一类长度18~25个核酸的非编码RNA，能与靶基因的3’UTR结合，发挥上调或下调靶基因的作用。诸多研究证实miR-18a在胃癌、肝癌、结直肠癌等多种肿瘤中高表达，提示miR-18a在肿瘤中发挥重要作用。但是miR-18a在电离辐射诱导结肠癌细胞死亡中作用及其机制还鲜有报道。目的：阐述miR-18a在电离辐射（IR）诱导结肠癌细胞死亡中的作用，并深入探讨miR-18a影响结肠癌细胞辐射敏感性的可能机制，为指导临床结肠癌

3、治疗方案的优化以及新治疗靶点的探索提供理论依据。方法：（1）选用人结肠癌细胞SW116和SW480为研究对象；（2）qRT-PCR法检测细胞内miR-18a的表达情况；（3）WesternBlot法检测蛋白水平变化；（4）集落形成实验检测细胞辐射敏感性；（5）流式细胞术检测细胞周期、凋亡率和自噬率；（6）QuantityOne软件对蛋白电泳条带进行灰度分析。结果：1.miR-18a对电离辐射诱导SW480细胞死亡、细胞周期、凋亡和自噬的影响（1）miR-18a对电离辐射诱导的SW480细胞死亡的影响集落形成实验表明，与NC组比较，mi

4、mic组照射后细胞存活分数明显增加（P<0.05）；与NCi组比较，inhibitor组细胞存活分数变化不明显。提示过表达miR-18a能减少电离辐射诱导的细胞死亡。（2）miR-18a对电离辐射诱导的SW480细胞周期的影响INC+4Gy组G2/M期细胞百分率明显高于NC组（P<0.05），mimic+4Gy组G2/M期细胞百分率明显低于mimic组（P<0.05），反转了这一情况。提示过表达miR-18a可以抑制电离辐射诱导的G2/M期阻滞。（3）miR-18a对电离辐射诱导的SW480细胞凋亡的影响NC+4Gy组细胞凋亡率比NC

5、组增加了1.26%，mimic+4Gy组细胞凋亡率比mimic组增加了0.38%。与NCi组比较，inhibitor组细胞凋亡率变化不明显。提示过表达miR-18a可以抑制电离辐射诱导的SW480细胞凋亡。（4）miR-18a对电离辐射诱导的SW480细胞自噬的影响与NC组比较，mimic组细胞自噬率略有增加；联合照射后，mimic+4Gy组细胞自噬率明显低于NC+4Gy组（P<0.05）。与NCi组比较，inhibitor组细胞自噬率略有增加；联合照射后，inhibitor+4Gy组细胞自噬率比NCi+4Gy组明显增加（P<0.05

6、）。提示过表达miR-18a可以抑制电离辐射诱导的SW480细胞自噬。2.miR-18a对电离辐射诱导SW116细胞死亡、细胞周期、凋亡和自噬的影响（1）miR-18a对电离辐射诱导SW116细胞死亡的影响集落形成实验表明，与NC组比较，mimic组照射后细胞存活分数明显降低（P<0.05），提示过表达miR-18a能增加电离辐射诱导的SW116细胞死亡。（2）miR-18a对电离辐射诱导的SW116细胞周期的影响NC+4Gy组G2/M期细胞百分率比NC组增加了4.25%，mimic+4Gy组G2/M期细胞百分率比mimic组增加8.

7、71%。提示过表达miR-18a可以增加电离辐射诱导的SW116细胞G2/M期阻滞。（3）miR-18a对电离辐射诱导SW116细胞凋亡的影响与NC组比较，mimic组细胞凋亡率明显增加（P<0.05）；联合照射后，mimic+4Gy组细胞凋亡率明显高于NC+4Gy组（P<0.05）。提示过表达miR-18a可以促进SW116细胞凋亡。（4）miR-18a对电离辐射诱导SW116细胞自噬的影响NC+4Gy组细胞自噬率比NC组增加了3.64%，mimic+4Gy组细胞自噬率比mimic组增加了7.67%。提示过表达miR-18a可以促进

8、电离辐射诱导的细胞自噬。II3.miR-18a在两种结肠癌细胞中调控ATM的表达（1）SW480细胞中miR-18a上调ATM表达蛋白电泳结果显示，mimic组ATM蛋白表达水平略高于NC组，并且mimic+4Gy组AT